Biotecnologia

METODO PARA LA EXTRACCION DE DNA CLOROPLASTIDICO DE BOUTELOUA GRACILIS COMO HERRAMIENTA PARA APLICACIONES MOLECULARES

Resumen

La manipulación genética del genoma de cloroplasto esta a la vanguardia en investigación biotecnológica. El pasto B. gracilis es un modelo para el estudio de estrés hídrico y oxidativo, capacidades relacionadas al cloroplasto. Es necesario tener un métodoque facilite la obtención de ADN de buena calidad, particularmente cuando se refiere al ADN de cloroplasto de B. gracilis. La implementación de un método para la extracción de cpADN se logró probando diferentes estrategias de extracción de cpADN reportados en la literatura y combinando las etapas más apropiadas para B. gracilis. La incorporación de un paso adicional del lavado con CTAB permitió larecuperación de cpDNA enriquecido, el cual se puede utilizar en el desarrollo de hermanitas moleculares. Debido la implementación de un protocolo de extracción también fue posible obtener una cantidad considerable de cpADN de B. gracilis. El cpADN fue digerido con varias enzimas de restricción y los fragmentos resultantes fueron analizados por Southern blot con las sondas de los genes de rADN 16Sy 23S. Con base en los perfiles de restricción, en este trabajo se reporta un mapa parcial de restricción del genoma del cloroplasto de B. gracilis y se plantea que la metodología aquí establecida en un futuro permitirá abordar la manipulación genética del genoma de cloroplasto.

Introduccion:

Las células de las plantas verdes y algunos protistas contienen organelos llamados cloroplastos;estos organelos pueden convertir la luz en energía química utilizable por el organismo. Los cloroplastos son organelos intracelulares que contienen la maquinaria necesaria para los procesos involucrados en la fotosíntesis. Estos participan en la biosíntesis de aminoácidos, nucleótidos, lípidos y carbohidratos. Al igual que las mitocondrias, el estroma de un cloroplasto alberga pequeñasmoléculas de DNA circular de doble cadena y ribosomas similares a las procariotas. El estudio de esta molécula promete ser una alternativa para el desarrollo biotecnológico de gramíneas de importancia en campos como la ganadería y la agricultura, además de ser una herramienta útil en el estudio de las características fisiológicas relacionadas con el cloroplasto. En 1963 se comprobó que los cloroplastoscontenían su propio; el DNA del cloroplasto (cpDNA) es un remanente de genomas de un simbionte bacteriano ancestral.
Dependiendo del organismo, el cloroplasto contiene de 60 a 200 genes que participan en la expresión génica.
El tamaño de la molécula de DNA cloroplastídico puede variar, dependiendo de la especie, entre 120 y 170 Kb. En los años 80 surgió la idea de realizar ingeniería genéticadentro del cloroplasto, desde entonces, el estudio del cpDNA de diferentes especies se ha perfilado como uno de los objetivos de la manipulación genética.
Ya se ha logrado insertar genes heterólogos en el genoma de cloroplasto; se han expresado antígenos para la elaboración de vacunas dentro de este organelo, así como proteínas de interés farmacéutico.
1. La modificación genética dentro delcloroplasto tiene ventajas cuando se compara con la modificación de DNA nuclear, debido a que las condiciones internas del cloroplasto presentan menos mecanismos de regulación debido a su carácter eucariótico

Además, la característica de mayor interés del cloroplasto es la manera como se transfiere a su descendencia preferentemente vía materna, lo que hace a este organelo un contenedor de genescon capacidad para evitar la liberación de polen transgénico, es decir, evitar la transferencia horizontal de genes.
La línea de investigación está enfocada al estudio del cpADN de B. gracilis (navajita azul),el cual es un pasto forrajero presente en amplias regiones del continente
y posee importantes características relacionadas a la resistencia al estrés hídrico. El interés del grupo de...