Biotecnologia

BIOTECNOLOGIA DE ALIMENTOS

PRACTICA: CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO POR ESPECTROFOTOMETRIA

a) Reanimación de los microorganismos.
Para la reanimación de los microorganismos se toma un vialcon los microorganismos seleccionados y conservados en congelación con glicerol para luego pasarlos a medio BYPO LIQUIDO CON SUSTRATO, agregar todo el contenido del vial y dejarlo en agitación en elagitador a 160 rpm durante 24 horas.
b) Preparación de la muestra para la curva de crecimiento.
Una vez pasada las 24 horas desde el inicio de la reanimación se prosigue a la preparación delMEDIO MINIMO CON SUSTRATO. Una vez realizado este procedimiento, con la ayuda de un aza de siembra inoculamos en matraces de 250ml y con 50ml de medio para empezar a hacer las lecturas en elespectrofotómetro.
c) Curva de crecimiento microbiano.
Para trazar la curva se sigue con el siguiente protocolo:
1. Calibración del equipo. Se calibro el equipo a 550nm y 660nm con MEDIO MINIMO estéril.2. Una vez realizada la siembra en matraces de 250ml y con 50ml de medio, instantáneamente se toma 1ml de la muestra de cada uno de los matraces para pasarles a cubetas de plástico para realizar lalectura a 550nm para bacterias y 660nm para levaduras. Siendo esta la lectura a la hora cero.
3. Esta primera lectura dará inicio a una serie de repeticiones del mismo procedimiento por cada horahasta que la lectura sea constante y se produzca un descenso en la lectura de absorbancia.
4. Cuando la lectura de la absorbancia supera los 0.6 se empieza a hacer las primeras diluciones 1:1;1:2; etc.
5. La cantidad de cel/ml se determina mediante la ecuación:
* Levadura
Cel/ml = (Ab+0.0023)/0.011 x 106
* Bacterias
cel/ml = (Ab/O.5)*10 x 106

6. Ejemplode Historial
Tiempo (hrs) | Ab | Observación |
0 | 0.01 | |
1 | 0.09 | |
2 | 0.18 | |
3 | 0.3 | |
4 | 0.6 | Límite |
5 | 0.3 | Diluir 1:1 H2O |
6 | 0.4 | Diluir 1:1 H2O |
7 |...