Buenas tareas

INTRODUCCIÓN.

La creación de fantasmas bacterianos se puede obtener a partir de la modificación del virus bacteriófago phi-x174 el cual genera un túnel en la pared y membrana de bacterias Gram negativas (el sistema no funciona con Gram positivas) lo cual provoca la salida del material genético. A esto se le puede asociar la utilización de nucleasas que desarman los ácidos nucleicos lo queasegura la privación de la expresión de genes bacterianos peligrosos. Al no conservar su material genético, la bacteria no se puede dividir pero mantiene los elementos antigénicos de la membrana, lo cual permite a nuestras defensas crear la memoria inmunogénica necesaria contra esa bacteria, memoria que actuará en caso de que se produzca una infección original con un microorganismo completo. Deesta forma, se crea una vacuna contra el microorganismo. Por otra parte, generar este tipo de bacterias sin su material genético permite obtener una membrana biológica que puede ser una útil herramienta para transportar elementos como otros antígenos, otros ácidos nucleicos incluso drogas y varios compuestos solubles como también la posibilidad de crear vacunas polivalentes. Para la obtención deestos fantasmas bacterianos se utiliza comúnmente el bacteriófago mencionado, sin embargo, los autores del estudio que presentaremos han intentado establecer un protocolo de perforación de la membrana bacteriana refinando la utilización de otras metodologías, como el uso del compuesto tensoactivo iónico dodecilsulfato sódico (SDS), el uso de hidróxido de sodio (NaOH), carbonato de calcio (CaCO3),y peróxido de hidrógeno (H2O2), los cuales eventualmente se pueden utilizar con la misma finalidad que el bacteriófago phi-x174. Para valorar los resultados, los autores utilizaron el sistema de optimización de Plackett-Burman y el método de randomización con la finalidad de obtener las mejores cantidades de material a utilizar y las condiciones más adecuadas para generar en forma lo más óptima(según permita la técnica) las bacterias fantasmas.




OBJETIVOS:
1. Presentar la investigación realizada por los autores en el artículo “Sponge-like: A new protocol for preparing bacterial ghosts” .
2. Analizar el estudio realizado para obtener bacterias fantasmas a partir del refinamiento de metodologías que utilizan SDS, NaOH, CaCO3 y H2O2 como alternativa.
3. Exponer los resultadosobtenidos por los autores y analizar la discusión enfocándonos en la viabilidad de los procesos aplicados para la obtención de bacterias fantasmas y las ventajas y desventajas que implica su potencial utilización.

Metodología utilizada y Resultados:
Los autores del artículo han utilizado cepas bacterianas obtenidas desde Promega (empresa donde se obtienen este tipo de productos). Como se haespecificado anteriormente, los autores intentarán ver la utilidad de varias sustancias químicas como posibles creadores de bacterias fantasmas, como método alternativo a la utilización de el Bacteriófago phi-x174.
Para ello desarrollaron un experimento de varias etapas:
1. Determinación de MIC y MGC. Lo primero que se realizó fue la obtención del MIC y MGC por cada sustancias químicautilizada, para utilizar esta variable en la tabla de Plackett Burman se les asignó 1+ y 1- respectivamente.
El MIC y el MGI para cada solución utilizada fue el siguiente:
Valor (1+) en diseño Plackett Burman
Na OH
SDS
H2O2 30%
MIC
0.0138 N
1.665 mg/mL
40.8 μL/mL

Valor (1-) en diseño Plackett Burman
Na OH
SDS
H2O2 30%
MGC
0.00231N
0.237 mg/mL
5.83 μL/mL



2. Con la finalidadde optimizar la utilización de las sustancias indicadas, los autores utilizaron el diseño experimental de Plackett Burman el cual fue realizado de la siguiente forma:
2.1. Se cultivaron las bacterias obtenidas de la Cepa E. Colli recombinante BL21 (DE3) por 72 horas en 500ml de NB a 37ºC.
2.2. La biomasa cultivada se centrifugó a 4000 rpm por 10 minutos, se eliminó el sobrenadante y se lavaron...