Cívica 3

“Secuenciación del ADN”


Una vez que un fragmento interesante de ADN se ha aislado o identificado, los científicos necesitan determinar si la secuencia de nucleótidos de dicho fragmentos es ungen conocido, o qué clase de proteína puede estar produciendo.
Los dos métodos de secuenciación utilizados, comparten etapas comunes que son:
Marcado: las moléculas a secuenciar se marcanradioactiva o fluorescentemente.
Separación: se genera una serie de cadenas sencillas de ADN marcadas, cuyos tamaños se diferencian en una única base.
Estas cadenas de distintas longitudes puedensepararse por electroforesis en gel desnaturalizantes, donde parecen una serie de bandas, cuya longitud varía en un único nucleótido.
Para obtener estas cadenas se utilizan los siguientes métodos:Método Químico | Desarrollado por Maxan y Gilbert en 1977. Esta técnica rompe cadenas sencillas de ADN marcadas radioactivamente con reacciones químicas específicas, para cada una de lascuatro bases. Los productos obtenidos en las cuatros reacciones se separan por electroforesis de acuerdo a su tamaño en el gel. La secuencia puede leerse en el patrón de bandas radioactivasobtenidas. |
Método Enzimático | Diseñado por Sanger, Nicklen y Coulson en 1977. Requiere de un ADN de cadena simple (Molde) y un cebador complementario de una región del ADN molde.El cebador se utiliza como sustrato de la enzima ADN polimerasa, que copia de forma complementaria el molde ADN. Una variable al método d Sanger consiste en marcar el cebador o los terminadores conun compuesto fluorescente y activar la reacción de secuencia. Los productos obtenidos se detectan por la fluorescencia emitida. |

Aplicaciones de la secuenciación de ADN
Lasinvestigaciones acerca de la secuenciación de ADN ha tenido un impacto significativo en diferentes campos como: Medicina, Paleontología, Ecología, Genética y otros, que utilizan esta técnica para realizar las...