cadena respiratoria

DEMOSTRACIÓN DE LA CADENA RESPIRATORIA
1.- OBJETIVOS:
Demostrara la oxidación mitocondrial del Succinato (sustrato), utilizando un aceptor artificial de electrones, el cual será determinada por colorimetría.
Demostrar la capacidad de reducción del 2,6-Diclorofenolindofenol.
Demostrar la inhibición de la Succinato deshidrogenasa.
Demostrar la actividad de la enzima SuccinatoDeshidrogenasa.
Demostrar la capacidad inhibitoria del Malonato.
2.- INTRODUCCIÓN
Se utiliza corazón fresco de rata el que se corta en trozos pequeños y se lava tres veces con agua destilada fría. Se filtra enseguida por gasa y los trozos de músculo obtenido, se suspenden en buffer fosfato de pH = 7.4. Esta preparación se homogeniza, en una licuadora fría y la suspensión obtenida se conserva en frío.
Esteproceso se revierte por el metabolismo de los animales, que es un proceso en el cual degradan estas moléculas para obtener energía y moléculas simples que son nuevamente el agua y el CO2.
Todos estos procesos se efectúan gracias a la presencia de ATP, que es una reserva de energía de forma transitoria para usarla de forma inmediata. Siendo el ATP tan importante se han determinado 3 formas parasintetizarlo que son:
Fosforilación a nivel de sustrato
Fosforilación
Fosforilación oxidativa




Siendo la fosforilación oxidativa el centro de nuestro estudio dado que posee procesos calificados como cadena respiratoria, donde el ATP se genera por consecuencia del flujo de electrones a través de transportadores y componentes como el NAD y FAD DESHIDROGENASA, UBIQUINONA y CITOCROMO, esteúltimo mediador entre el O2 y los sustratos reducidos, estos compuestos se organizan en la membrana interna de la mitocondria de forma específica para asegurar el funcionamiento y las propiedades redox de los componentes, siendo la mitocondria la fuente de poder más importante de las células animales . Entonces para formar ATP dentro de la cadena respiratoria de las mitocondrias, se producen unaserie de transferencias de electrones por reducción y oxidación de los componentes de la cadena, tratados de resumir en pequeños complejos más entendibles, comenzando por la donación de electrones desde el NADH a la UBIQUINONA, catalizado por la Ubiquinona reductasa ( complejo I ). También se transfieren electrones desde el Succinato a la Ubiquinona (complejo II), nombrándose a este complejoSuccinato-reductasa ó Succinato Deshidrogenasa, que ayuda a catalizar la oxidación del Succinato. Es importante mencionar que la transferencia de 2 electrones desde el Succinato a la Ubiquinona comprende un grupo proteico FAD y centro Fe-S. Estos pasos del nombrado complejo II también libera ATP pero en poca cantidad. Los electrones se pasan del complejo II al III formado por los citocromos.
Como formaglobal se tiene que la transferencia de electrones desde el Succinato a O2 por la cadena y sus transportadores da como resultado ATP, que son 2 moléculas y no 3, que se obtienen del NADH al O2.
Todos estos sistemas dentro de la cadena tienen características redox propias por la donación y la aceptación de electrones en distintos niveles de la cadena, para estudiar y analizar la dinámica de lacadena se utilizan por sus propiedades redox sustancias orgánicas no fisiológicas que se intercalan entre los transportadores, indicando el estado redox de la cadena, mostrando a través de las propiedades del indicador el estado de la reacción.

En la figura se esquematizan dos de los principales procesos metabólicos que ocurren en la mitocondria, y que nos van a permitir identificarla: el ciclo deKrebs y la cadena respiratoria.


En el llamado ciclo de Krebs el resultado neto es la oxidación de un grupo acetilo (CH3−C=O) perteneciente a la acetil-CoA a dos moléculas de CO2, y en paralelo la reducción de tres NAD+ y un FAD para dar 3 NADH y un FADH2, respectivamente. Todas las enzimas que catalizan las reacciones del ciclo de Krebs se hallan en la matriz mitocondrial, excepto la...