calculos renales

1. Indique el fundamento del método de Bradford para la determinación de proteínas.
Cuando el Azul Brillante de Coomassie G-250 se une a las proteínas, el tinte cambia de color, desde rojizo a azulado, y el máximo de absorción del tinte se desplaza de 465 nm hasta 595 nm. El cambio en la absorbancia a 595 nm es proporcional a la concentración de proteínas de la muestra. Al igual que otrosmétodos de tinción, el de Bradford se fundamenta en la naturaleza anfótera de las proteínas. Cuando la disolución que contiene las proteínas se acidula hasta un pH por debajo del punto isoeléctrico de las proteínas o las proteínas de interés, el tinte añadido se une electrostáticamente. La eficiencia de la unión se ve aumentada por la interacción hidrófoba de la molécula de tinte con la cadenapolipéptica adyacente a los residuos positivamente cargados en la proteína. En el caso del método de Bradford, el tinte unido a la proteína presenta un cambio en su espectro de absorción, en comparación con el tinte no unido.
2. Investigue la composición del reactivo de Bradford y muestre la estructura química del colorante que contiene.








Azul Brillante de Coomasie G-250 (100mg) esdisuelto en 50 ml de etanol 95%. A esta disolución se le añade 100ml de ácido fosfórico 85% p/v. La solución resultante se diluye llevándola hasta un litro de volumen final. La concentración en la disolución final es 0,01% p/v de azul, 4,7% p/v de etanol y 8,5 % p/v de ácido fosfórico.
3. Indique las ventajas y desventajas que presenta el método utilizado con respecto a otros métodosespectrofotométricos (Biuret, Lowry, BCA, Absorción 280 nm).
Ventajas:
1.- Es rápido; la reacción se puede completar en 2 minutos.
2.- Es reproducible.
3.- Es sensible; varias veces más sensibles que el método de Lowry.
4.- No se presentan interferencias procedentes del sulfato de amonio, los polifenoles, los hidratos de carbono tales como la sacarosa o los cationes tales como el K+,el Na+,y el Mg2+.
5.- Midelas proteínas y los péptidos con una masa molecular aporximadamente igual o mayor que 4.000 Da.
Desventajas:
1.-Sufre interferencias con los detergentes tanto iónicos como no iónicos, tales como el Triton X-100 y el dodecilsulfonato de sodio. Sin embargo, los errores debidos a pequeñas cantidades (0.1%) de dichos detergentes pueden ser corregidos utilizando los controles adecuados.
2.-Elcomplejo proteína-tinte puede adherirse a las cubetas de cuarzo. El analista deben utilizar cubetas de vidrio o de plástico.
3.- La coloración varía con los diferentes tipos de proteínas. La proteína patrón debe ser elegida cuidadosamente.
4. ¿Por qué no se recomienda tomar lecturas de muestras al haber transcurrido 1 h después de la adición del reactivo de Bradford?
El color del complejo proteicoes estable al menos por 1 hora, después de la hora se volverá instable y se tendrán errores en los cálculos.
5. ¿A qué se llama desnaturalización de una proteína? ¿Es posible que una proteína desnaturalizada se cuantifique por el método de Bradford, Biuret o Lowry? Justifique su respuesta
Se entiende por desnaturalización de las proteínas a la modificación que sufre la estructura de lasproteínas como así también las de los ácidos nucleicos. En el proceso de desnaturalización de las proteínas podemos observar el cambio de su estructura nativa, como se afectado su funcionamiento y su cambio de acuerdo a su actividad fisicoquímica.
Lowry NO. Ya que el reactivo fenólico de Folin-Ciocalteau reacciona con residuos de Tirosina y Triptófano.
Biure SI. Ya que dice que cuando los iones cúpricosse acomplejan con los enlaces peptídicos ( de sustancias que contenga, al menos dos enlaces peptídicos ,es decir el biuret, los péptidos grandes y TODAS LAS PROTEINAS)
Bradford SI. Porque la solución que contiene las proteínas se acidula hasta un pH por debajo del punto isoeléctrico de la proteína o de las proteínas de interés, el tinte añadido se una electrostáticamente.

6. Una...