Camara de neubauer

CÁMARA THOMA Y NEUBAUER IMPROVED PARA EL RECUENTO DE LEVADURAS (TIRAJE)
En este documento se pretende explicar de forma clara y sencilla el proceso de recuento y viabilidad de las levaduras para el tiraje así como el uso de las fórmulas correspondientes en cada caso. Es un proceso sencillo pero requiere de una determinada paciencia para no equivocarse y conseguir un buen resultado.

Fig. 1:Foto y esquema de una cámara Thoma

Cámara Thoma
Datos básicos: 2 Cuadro central (centro de la cruz, 400 cuadros pequeños): 1mm /400 cuadros. Cuadro mediano (formado por 25 cuadros pequeños): 0.25 mm x 0.25 mm 2 Cuadro pequeño: 0.05 mm x 0.05 mm = 0.0025 mm Líneas separadoras de cuadros medianos (en rojo): 0.025 mm del extremo del cuadro pequeño

Fig. 2: Cámara Thoma

Cámara Neubauerimproved:
Datos básicos (mismas medidas que las anteriores excepto cuadro mediano): Cuadro grande central (formado por 400 cuadros pequeños): 1mm2/400 cuadros. Cuadro mediano (formado por 16 cuadros pequeños): 0.2 mm x 0.2 mm Cuadro pequeño: 0.05 mm x 0.05 mm = 0.0025 mm2 Lineas separadoras: 0.025 mm
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La diferencia entre la cámara Thoma y la cámara Neubauer reside en los cuadros laterales marcados con una “L”. Éstos sirven para recuento de otros microorganismos celulares. Para el caso del tiraje, no existe diferencia alguna porque se utiliza el cuadro central.

Fig. 3: Cámara Neubauer improved

Como utilizar las cámaras? Preparaciónde la muestra:
123456789Lavar la cámara y el cubre con agua destilada y alcohol 96% Secar bien con papel suave. Poner el cubreobjetos encima de la cámara Homogeneizar removiendo bien el cultivo en donde residen las levaduras Tomar con pipeta una muestra Poner la punta de la pipeta en una de las dos ranuras de la cámara y, por capilaridad, las levaduras se distribuirán en la cámara Si se crea unacámara de aire repetir la operación desde el principio. Fijar la cámara de recuento en la platina del microscopio para realizar la observación microscópica Esperar unos minutos antes de contar para que las levaduras se depositen en la cámara

Preparativos del microscopio:
El enfoque del microscopio se empieza con el objetivo de menor aumento que posteriormente pasaremos a uno de más. Se centrael objetivo del microscopio a ojo en el centro teórico de la cruz de la cámara, luego se coloca el objetivo lo más cerca posible del cubreobjetos pero sin tocarlo y posteriormente se irá alejandolo hasta que la imagen sea lo más clara y nítida posible. Se aconseja trabajar a 400 aumentos.

Contabilizar levaduras totales (recuento):
Se aconseja siempre hacer la media de levaduras contenidas envarios grupos de cuadros. Sea cual fuese el modelo de cámara empleado, el procedimiento es el mismo. Por ejemplo según la fig. 4, se presenta contabilizar las levaduras contenidas en los grupos de 25 y 16 cuadros respectivamente según la cámara usada. Ej (cámara Thoma, grupos de 25 cuadros): grupo 1 (G1) de 25 cuadros --> 14 levaduras
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grupo 2 (G2) de 25 cuadros grupo 3 (G3) “ grupo 4 (G4) “

--> 15 levaduras --> 13 “ --> 14 “

Media 14+15+13+14 / 4 = 14 levaduras en 25 cuadros.

G1 G2 G3 G4
Fig. 4: Ejemplo de recuento por grupos en cámara Thoma y Neubauer improved

Y aplicar la fórmula genérica siguiente: X levaduras Ycuadros x # cuadros cámara Volumen cámara x 1000 mm 3 1 cm (o 1 mL)
3

= x millones de levaduras / mL

Tanto una cámara como otra tienen 400 cuadros útiles. Volumen de la cámara Thoma = 1mm x 1mm x 0,1mm = 0,1 mm3 (largo x ancho x profundo) Volumen útil de la cámara Neubauer improved = 0.2mm x 0.2mm x 0,1mm x 25 = 0,1 mm3 Es decir, tanto si se usa la cámara Thoma como la Neubauer improved,...