Camara de New Bauer

INTRODUCCIÓN
A pesar del enorme desarrollo tecnológico que ha tenido lugar en los laboratorios científicos, el conteo visual con hematocitómetro sigue siendo el método de conteo más extendido desde el siglo XIX.
El presente informe se escribe con la intención de realizar un conteocelular con un hematocitómetro o cámara de Neubauer a principiantes, y también a técnicos o investigadoresexperimentados que deseen recordar las bases del mismo.
Primero, describiremos cada una de las partes y los principios de funcionamiento del hematocitómetro.
En una segunda parte, se describe paso a paso cómo realizar un recuento celular con hematocitómetropara obtener unos resultados fiables.

OBJETIVOS
Determinar el número de leucocitos presentes en un volumen determinado de sangre
Aprender arealizar y aplicar la metodología para un recuento de Leucocitos por milímetro cúbico de sangre e interpretar el resultado.

MARCO TEÓRICO
La Cámara De Neubauer, o Hematocitometro
Se trata de una gruesa placa de cristal con forma de portaobjetos, de unos 30 x 70 mm y unos 4 mm de grosor. En una cámara simple, la porción central, que es donde se realiza el conteo, está dividida en 3partes.En la parte central se encuentra grabada una retícula cuadrangular. En el caso de cámaras dobles, que son las más comunes, existen 2 zonas de conteo, una superior y otra inferior al eje longitudinal de la cámara.

Fig 1. Cámara de Neubauer comercial
La retícula completa mide 3 mm x 3 mm de lado. Subdividida a su vez en 9 cuadrados de 1mm de lado cada uno.
En caso de recuento de sangre, loscuadrados de las esquinas son los destinados al recuento de leucocitos. Al existir estos en menor número que los hematíes, se necesitan menos líneas de referencia para realizar el conteo.
El cuadrado central es el destinado al recuento de hematíes y plaquetas. Se divide en 25 cuadrados medianos de 0,2 mm de lado, y cada uno de estos cuadros se subdivide a su vez en 16 cuadrados pequeños.
Elcuadrado central está por tanto formado por 400 cuadrados pequeños.

Cubreobjetos
El cubreobjetos es un cuadrado de cristal de aproximadamente 22mmx 22 mm. Debe colocarse sobre la cámara de recuento de forma que cubra la parte central de la cámara, delimitando un espacio entre la cámara y el cubreobjetos de 0,1 mm.
Es común que el cubreobjetos quede ligeramente levantado cuando aplicamos máslíquido del necesario a la cámara. Para evitar esto, existen algunas cámarasque tienen dos pinzas especiales para evitar que el cubreobjetos se levante, y la distancia sea mayor de 0,1 mm.

Pipeta
Se trata de un instrumento de laboratorio que permite medir alícuotade líquido con bastante precisión. Típicamente han sido principalmente de vidrio, pero en la actualidad se utilizan ampliamente lasmicropipetas, que tienen puntas esterilizadas desechables. Las más habituales estáncalibradas para una capacidad máxima de 20, 200 y 1000 uL.


Fig 2. Detalle de la rejilla de una cámara de Neubauer Improved.
MATERIALES Y MÉTODOS
Jeringa 5cc
Algodón
Alcohol
Tubo de goma
Tubos de ensayo con anticoagulante EDTA
Pipeta de Thoma para glóbulos blancos (perla blanca)
1 Microscopio
1 Cámara derecuento Neubauer
1 Cubre de cámara
1 Pipeta
1 Gradilla
1 par de guantes
Sangre venosa
Liquido de Turk 


CONTEO CELULAR, PASO A PASO
PASO 1. Preparación de la muestra.
Dependiendo del tipo de muestra a medir, se ha de habrá de prepararar una muestra con una concentración apta para su recuento.
Típicamente, el rango de concentraciones que permite contar el hematocitómetro está entre250.000 células y 2,5 millones de células por ml.
Intentaremos que la muestra tenga una concentración en torno a 106 (1 millón) aplicando las diluciones correspondientes.
Por debajo de 250.000 células/ ml (2,5 * 105) la cantidad de células contadas no es suficiente para poder dar una estimación lo suficientemente fiable de la concentración celular.
La concentración óptima para conteo en...