Caracterización De Calulas Madre Derivadas De Tejido Adiposo

 
 
  RESUMEN
 DEL
 MATERIAL
 Y
 MÉTODOS
 UTILIZADOS
 EN
 UNA
 PUBLICACIÓN
  CIENTÍFICA
 DE
 CULTIVOS
 CELULARES.
 
 
 
 
  El
 artículo
 científico
 elegido
 para
 comentar
 la
 parte
 de
 cultivos
 celulares
 del
  material
 y
 métodos
 fue
 el
 siguiente:
 High
 efficient isolation
 and
 systematic
  identification
 of
 human
 adipose-­derived
 mesenchymal
 stem
 cells.
 
 
  En
 la
 introducción
 del
 artículo
 se
 explica
 la
 importancia
 de
 las
 células
  madre
 mesenquimales
 derivadas
 del
 tejido
 adiposo
 y
 como
 éstas
 con
 más
  fácilmente aisladas
 y
 cultivadas
 que
 las
 procedentes
 de
 médula
 ósea
 humana.
  También
 comentan
 que
 todavía
 no
 se
 han
 desarrollado
 métodos
 eficaces
  ampliamente
 aceptados
 para
 aislar
 y
 cultivar
 estas
 células
 madre
 mesenquimales
  de
 modo
 que
 los
 cultivos
 sean
 muy homogéneos,
 y
 las
 células
 estén
 muy
  indiferenciadas,
 aunque
 varios
 laboratorios
 han
 conseguido
 aislarlas
 y
 cultivarlas
  con
 éxito.
 
  El
 objetivo
 que
 se
 plantean
 en
 este
 artículo
 es
 el
 de
 desarrollar
 un
 método
 
  muy
 eficiente
 para
 el
 aislamiento
 , cultivo
 e
 identificación
 de
 este
 tipo
 de
 células.
  MATERIAL
 Y
 MÉTODOS:
  El
 tejido
 adiposo
 se
 obtuvo
 de
 mujeres
 que
 se
 encontraban
 en
 el
  departamento
 de
 maternidad
 de
 un
 hospital,
 dado
 que
 iban
 a
 ser
 intervenidas
 para
  hacerles
 una
 cesárea.
 Dicho tejido
 adiposo
 se
 obtuvo
 del
 tejido
 subcutáneo
  abdominal.
 Estas
 mujeres
 estaban
 sanas
 y
 no
 se
 encontraban
 bajo
 ningún
  tratamiento
 médico.
 Todas
 las
 mujeres
 fueron
 informadas
 y
 se
 pidió
 su
  consentimiento,
 al
 igual
 que
 dio
 su
 consentimiento
 el
 comité de
 ética
 de
 la
  universidad
 de
 Jilin.
  • Aislamiento
 y
 cultivo
 

Una
 muestra
 de
 5
 gr.
 de
 tejido
 adiposo
 se
 introdujo
 en
 un
 recipiente
 estéril
  junto
 con
 tampón
 fosfato
 salino
 (PBS,
 0,1M)
 y
 se
 conservó
 a
 4°C
 durante
 24
 horas
  antes
 de su
 uso.
 
 Posteriormente
 la
 muestra
 se
 lavó
 muy
 bien
 con
 solución
 PBS
 
  que
 contenía
 1000
 U/ml
 de
 penicilina
 y
 1000
 μg/ml
 de
 estreptomicina.
 Se
 eliminó
  el
 tejido
 conjuntivo
 y
 los
 vasos
 sanguíneos
 y
 se
 hicieron
 piezas
 de
 1
 mmÚ.
 La matriz
  extracelular
 fue
 digerida
 con
 colagenasa
 
 de
 tipo
 1
 al
 0,1%
 
 a
 37°C,
 y
 se
 agitaron
  durante
 60
 minutos
 para
 separar
 las
 células
 estromales
 de
 los
 adipocitos
  primarios.
 Para
 neutralizar
 la
 actividad
 de
 la
 colagenasa
 tipo
 1
 se
 añadió un
  volumen
 igual
 de
 medio
 mínimo
 esencial
 de
 Eagle
 modificado
 por
 dulbecco
 con
  glucosa
 baja
 (L-­‐DMEM)
 con
 un
 10%
 de
 suero
 fetal
 bovino
 (FBS).Posteriormente
 se
  filtró
 para
 eliminar
 los
 desechos
 y
 se
 centrifugó
 a
 1500
 rpm
 durante
 10...