cazadores de microbios

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE
objetivo:
.
fundamento:

material y equipo: sustancias:
-centrifuga
-tubos de ensaye cónicos-sol. salina isotónica
-gasa cortada en cuadros -sol. de formaldehido al 10%
-embudos de polietileno-éter
-vasos de precipitados de 50 ml. -heces fecales
-aplicadores de madera -yodo lugol
-pipetas pasteur con bulbo
-portaobjetos-cubreobjetos
-microscopio

metodo:
a) con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 2 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitados, se añaden 10 ml de solución salina y sehomogeniza.
b) se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo recogiendo el filtrado en el tubo cónico.
c) se centrifuga la suspensión durante 2 min.a 2000 r.p.m
d) se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con la solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más
e) al último sedimento se agregan 5 ml.de sol. de formaldehido al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.
f) se añaden después 5 ml. de éter, se tapan los tubos y se agitan energéticamente durante 30 seg.
g) secentrifuga durante 2 min. a 2000 r.p.m.
h) después de centrifugar se observan 4 capas ( aunque en ocasiones no se observan muy bien estas capas):
>éter en la superficial
>un tapón de restos fecales>formaldehido
>sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.
i) se decanta el sobrenadante.
j) se introduce la pipeta pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado unagota del sedimento y se coloca en el portaobjetos.
k) se le añade una gota de lugol y se le coloca el cubreobjetos.
l) se observa la preparación en el microscopio con los objetivos 10x y 40x....