Celulas procariotas

Células procariotas
Fundamentos:
Las células procariotas estructuralmente son las más simples y pequeñas. Como toda célula, están delimitadas por una membrana plasmática que contiene pliegues hacia el interior (invaginaciones) algunos de los cuales son denominados laminillas y otro es denominado mesosoma y está relacionado con la división de la célula. La célula procariota por fuera de lamembrana está rodeada por una pared celular que le brinda protección. El interior de la célula se denomina citoplasma. En el centro es posible hallar una región más densa, llamada nucleoide, donde se encuentra el material genético o ADN. Es decir que el ADN no está separado del resto del citoplasma y está asociado al mesosoma. En el citoplasma también hay ribosomas, que son estructuras que tienen lafunción de fabricar proteínas. Pueden estar libres o formando conjuntos denominados polirribosomas. Las células procariotas pueden tener distintas estructuras que le permiten la locomoción, como por ejemplo las cilias (que parecen pelitos) o flagelos (filamentos más largos que las cilias).

Esquema de célula procariota. Las bacterias son los organismos que poseen una organización celular de estetipo. La zona sombreada en el citoplasma representa el nucleoide, zona más densa donde se encuentra el ADN bacteriano y no está físicamente separado del resto de las estructuras citoplasmáticas.

Objetivos:

* Reconocer los diferentes tipos de bacterias.
* Saber que tipos de bacterias se tiñen con la tinción gram.

Materiales:
En este experimento se utilizó:
* Microscopio
*Cristal violeta
* Lugol
* Etanol
* Safranina
* Aceite de Inmersión
* Mechero
* Yogurt Natural
* Vinagre de Manzana
* Sarro Dental

Metodología:
* Recoge las muestras.
* Se hace un extendido.
* Dejar seca.
* Agregar cristal violeta o violeta de genciana y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas se tiñen de colorazul-purpura.
* Enjuagar con agua.
* Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.
* Enjuagar con agua.
* Agregar acetona y/o alcohol y esperar 30 segundos (parte critica de la coloración)
* Enjuagar con agua.
* Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
* Enjuagar con agua.
*Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
El cristal violeta(colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo, y actúa demordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran,mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para latécnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).
Esta importante coloración diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. En este método de...