Cinética Enzimática De La Hidrolisis Enzimática Del Almidón Con Alfa- Amilasa

CINÉTICA ENZIMÁTICA DE LA HIDROLISIS ENZIMÁTICA DEL ALMIDÓN CON - AMILASA
Giovanna Diossa Gallego*

*Universidad Pontificia Bolivariana, Circular. 1 #70-01, Medellín, Colombia

INTRODUCCIÓN
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo dela reacción catalítica y de la especificidad de la enzima.
La medida de la cinética se realiza siempre en las condiciones óptimas de PH, temperatura, presencias de cofactores etc. Además con concentraciones saturadas de sustrato la velocidad de reacción observada es la velocidad máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse midiendo la aparición de los productos o la desaparición de losreactivos. Al seguir estas velocidades de aparición o desaparición en función del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reacción, o simplemente, la cinética de la reacción. A medida que la reacción transcurre, la velocidad de acumulación del producto va disminuyendo porque se va consumiendo el sustrato de la reacción. [1]
Para estudiar la cinética enzimática se mide el efecto de laconcentración inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la reacción, manteniendo la cantidad de enzima constante.
La actividad catalítica de un enzima se determina midiendo la velocidad inicial de reacción, que es la pendiente de la curva de progreso (curva de producto formado o sustrato transformado frente al tiempo) en el tiempo cero. Inicialmente, las reacciones transcurren linealmente,pudiéndose tomarla pendiente de esta recta como velocidad inicial. A tiempos más largos, el progreso de la reacción se aparta de la linealidad. Esta caída de la velocidad de reacción se debe a la disminución significativa de la concentración de sustrato, aunque también pueden influir otros factores como el aumento de la concentración de producto, cambios de pH, inactivación del enzima, etc. [2]Efecto de la concentración de sustrato sobre la actividad enzimática [2]
La grafica que representa el efecto de la concentración de sustrato sobre la Velocidad de una reacción catalizada enzimáticamente es conocida como curva de saturación hiperbólica por el sustrato (figura1), constituye la norma seguida por la mayoría de los enzimas. El modelo cinético se ajusta a la ecuación:
v = Vmax [S] /(Km + [S]) (1)
Donde Km es la constante de Michaelis e indica la afinidad del enzima por su
Sustrato, y Vmax es la velocidad máxima e indica la capacidad catalítica.

Figura 1. Efecto de la concentración de sustrato sobre la actividad enzimática. Curva de saturación hiperbólica por el sustrato.
La determinación de los anteriores parámetros cinéticos (Vmax y Km) se puede determinarutilizando las representaciones de Lineweaver-Burk (1/v : 1/[S]) y de Eadie-Hofstee (v : v/[S]).

Figura 2. Representaciones de Lineweaver-Burk (panel izquierdo) y de Eadie-Hofstee (Panel derecho).
* Ecuación de Linewever-Burk: 1/v = 1/Vmax + Km/Vmax 1/[S] (2)
* Ecuación de Eadie-Hofstee: v= Vmax – Km v/[S] . (3)
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El almidón  se ha convertido en un biopolímero muy importante y seutiliza en muchas industrias como materia prima. En varios procesos industriales, las enzimas  se utilizan para transformar el almidón en moléculas útiles y de valor agregado bioquímicos. Ejemplos de dos industrias que se han beneficiado de este desarrollo son las industrias de edulcorantes y etanol. La α- amilasa es también ampliamente utilizada en industrias como la alimentaria, textil, etc Porejemplo, los materiales químicos utilizados en la industria textil, que son capaces de eliminar el almidón de los textiles, que son perjudiciales para los tejidos y el medio ambiente. Por lo tanto, como materiales alternativos de desencolado se utilizan α- amilasas que se producen a partir de fuentes diferentes y tienen diferentes propiedades. [6,7]
OBJETIVOS

• Determinación de velocidades...