citometria

CITOMETRIA DE FLUJO
1. ¿Qué es ?
La citometria de flujo (CMF) es una técnica de análisis celular multiparametrico  cuyo fundamento se basa en hacer pasar una suspensión de partículas  (generalmente células) alineadas y de una en una por delante de un haz de láser focalizado. La citometría de flujo es una tecnología (proceso) que permite la medida simultánea de múltiples características físicasde una sola célula. Estas medidas son realizadas mientras las células (partículas) pasan en fila, a una velocidad de 500 a 4000 células por segundo, a través del aparato de medida en una corriente de fluido.

2. EL CITOMETRO NECESITA UN SISTEMA COMBINADO
Fluidos, para introducir y restringir las células para análisis
Optica , una fuente de excitación y un sistema colección para generar yrecoger las señales luminosas. El sistema de excitación consiste en un láser, lentes y prismas para dirigir el rayo. El sistema de colección consiste en espejos ópticos y filtros para encaminar determinadas longitudes de onda hacia detectores ópticos determinados.
Electrónica, para convertir las señales ópticas en señales electrónicas proporcionales y digitalizarlas para análisis computacional

3.PARAMETROS
Características Morfológicas  de la célula : tamaño y complejidad del citoplasma
Características antigenicas  de la célula : Inmunofenotipo.
PARAMETROS FISICOS
Su tamaño relativo (forward scatter-FSC)
Su granularidad relativa o complejidad interna ( side scatter SSC).
4. OBJETIVOS PRINCIPALES DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

Identificar y enumerar subpoblacionescelulares únicas y definidas.
Seleccionar y separar físicamente subpoblaciones de células deseadas (por deflección electrostática ; esta tecnología de separación se llama "electronic cell sorting")
Medir capacidad funcional de subpoblaciones celulares definidas




5. DETECCION DE CARACTERISTICAS
El citómetro de flujo detecta como las células interactúan con un rayo láser en términos de cómola célula :

desvía la luz incidente (parámetros FSC y SSC)
emite fluorescencia (parámetros FL1. FL2. FL3)(1).

6. FLUORESCENCIA
Un fluorocromo es una  molécula química que absorbe la luz a una determinada longitud de onda (ENERGIA ) energía de excitación y emite a una longitud superior (MENOR ENERGIA)
Interacciona con la luz de excitación procedente de el láser. Se utiliza unido aanticuerpos específicos (monoclonales ) para antígenos de la célula. La cantidad de fluorescencia con la cual una célula se tiñe es proporcional a la cantidad de sitios de unión.

7. OBTENCION DE LA LUZ FLUORESCENTE
Unión de sitios específicos con anticuerpos marcados con fluorocromos
El fluorocromo absorbe energía del láser
El fluorocromo libera energía absorbida por :
Vibración ydisipación del calor.
Emisión de fotones a una mayor longitud de onda llamada  fluorescencia

8. APLICACIONES DE LA CITOMETRIA DE FLUJO
Hematología : tipificacion y conteo de células , reticulocitos y análisis de medula ósea .
Farmacología :estudios de cinética celular
Inmunología :subpoblaciones de linfocitos ,tipaje tisular
Oncología :Diagnostico y pronostico ,monitores de tratamientosMicrobiología :diagnostico bacteriano y virico ,estudios de sensibilidad a los antibióticos
Genética : Cariotipo y diagnostico de portador y diagnostico prenatal.
9. VENTAJAS DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

Análisis de un número estadísticamente significativo de células ( 1000 a más de 100.000 células).
Múltiples marcajes de una sola célula.
Análisis de alto numero de partículas en corto tiempo(5.000 eventos /seg. ).
Alta sensibilidad y objetividad.
Medidas separadas de cada célula (no sólo el promedio).
Medidas cuantitativas : discriminación de las células según la cantidad de marcador.
Múltiples parámetros : define subpoblaciones complejas.
Miles de células por segundo (1).

10. DESVENTAJAS DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

Poca información morfológica de la célula
No...