Clase Capitulo III Cromatografia TLC 2015 1
Las fases cromatográficas son dos:
La fase móvil: que fluye a través de una fase
estacionaria, arrastrando con ella a los
compuestos de la mezcla.
La fase estacionaria: en la cual están retenidos
los componentes de la muestra, y a través de la
cual fluye la fase móvil arrastrando a los
mismos.
En el equilibrio
- Pueden regir procesos de reparto ó procesos de
adsorción. (enalgunos casos ambos coexisten)
- Reparto, los componentes de la mezcla a separar
tienen un coeficiente de partición característico que
determinará el reparto de dicho compuesto en ambas
fases.
- Adsorción, una determinada especie química es
retenida en los sitios activos de la superficie de un
sólido.
Cromatografía de REPARTO
Separación de las moléculas por diferencias de
distribución (K)
AnalitoFuerzas de transmisión
FM
Fuerzas de retardo
FE
El sistema consta de dos componentes distinguibles: FE y FM en
éste sistema se colocan las moléculas separándose según el
resultado de una serie de equilibrios, entre las fuerza de
transmisión y las de retardo. La distribución esta dada por el k
El coeficiente de partición (k) depende de:
• Estructura del analito (A)
• Naturaleza química de lasdos fases
• Temperatura
• pH
K = [A] FE
[A] FM
F.M.
Compuestos a separar
F.E.
Los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase
estacionaria y la móvil. Si un componente está la mayor
parte del tiempo en la fase móvil el compuesto se mueve
rápidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte
en la fase estacionaria, el compuesto queda retenido y su
salida es mucho más lenta.
Deesta manera se produce la separación
Clasificación de los métodos cromatográficos
En Papel
ParticiónReparto
TLC
HPLC
GLC
Adsorción
Cromatografía
TLC
HPLC
GSC
Exclusión
Tradicional
HPLC
Intercambio
Iónico
Tradicional
afinidad
Tradicional
HPLC
HPLC
Cuales son las cromatografias de reparto?
Cromatografía en Papel
Líquidas
Cromatografía en capa fina
Cromatografía en columnaCromatografía de Gases
F.E.= Sorbente
Terminología
F.M.= Disolvente
Analito= Soluto
Cromatografia en Capa Fina
• Herramienta de análisis
rápida y eficiente (monitoreo)
• Purificación y aislamiento
• Cuantificación
• Se desarrollo por la
necesidad de separar
moléculas no polares (ej:
lipidos)
Cromatografía en Capa Fina-Consideraciones Generales
Soporte - FE: lámina de sorbente sobre placa devidrio, plástico o
aluminio (Sílica gel, óxido de aluminio, tierra de diatomeas,
poliestireno, politetrafluoretileno, sílica modificada- C8- C18- aminociano- etc)
Fases móviles: se deben elegir sistemas de solventes poco complejos
en su composición, con mínima sensibilidad a la temperatura y que
generen suficiente separación de los constituyentes de la muestra.
Mecanismos de separación:fenómenos de partición-adsorción.
Siembra: Para obtener bandas o manchas bien definidas debe
aplicarse sobre el cromatograma la mínima cantidad posible de
material.
Cromatografia en Capa Fina
Fundamento de la Separacón
Fuerzas de Van der Walls
Puentes Hidrógeno
VENTAJAS DE LA TLC
Requiere equipamiento simple y de bajo costo
Mayor resolución que cromatografía en papel
(manchas maspequeñas y definidas, partículas finas,
mayor superficie activa)
Mayor velocidad de separación
Tiene gran sensibilidad. Fácil detección. Requiere
poca cantidad de muestra y de solvente.
Fácil comprensión y ejecución
Se obtienen resultados en muy corto tiempo es
reproducible y versátil
Puede
obtenerse
información
cuali,
cuantitativa de los principales compuestos.
Fácilaislamiento
El fingerprint (huella digital) puede ser documentado.
semi
y
Pasos en la realización de la
Cromatografia en Capa Fina
• Aplicación de extracto y patrones o
estandares
• Desarrollo en cuba cromatográfica
• Secado del solvente
• Revelado
• Recuperación
Cromatografía en Capa Fina-Consideraciones generales
Siembra:
– Pequeño volumen
– Punto de origen
– Estándares
Desarrollo:
–...
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