Coloracion

Técnicas de coloración y reconocimiento de microorganismo.

Objetivo:
• Conocer algunas de las tinciones y diversidad microbiana.
• Reconocer tanto como macroscópica como microscópicamente grupos de colonias.
Materiales:
1. Cepas de bacterias
2. Hongos
3. Levaduras
4. Cristal violeta
5. Lugol
6. Alcohol acetona
7. Fucsina básica
8. Azul de metileno
9. Verde malaquita
10. Azul delactofenol
Marco teórico:
(el de las copias o este no importa)
La tinción es una técnica que utiliza colorantes para aumentar el contraste entre los microorganismos y el medio que los rodea. Se utiliza para diferenciar los tipos de células, los constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, capsulas, paredes celulares, núcleo, mitocondria, célula etc.
Tinciones
Son técnicas quepermiten observar microorganismos en función de la capacidad de los
mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la
célula y del colorante. Los colorantes pueden ser de distintos tipos:
Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de las células y
las tiñen. Ejemplos: azul de metileno, cristal violeta, safranina.Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen las
células, sino el entorno. En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina,
nigrosina.
Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: negro sudán.
Las tinciones pueden ser:
Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen unacomposición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de
forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (azul de metileno,
safranina) o no (nigrosina).
Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta
composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo 6
quepermite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad de
tinción. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: la
tinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estas tinciones
utilizan más de un colorante.
Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta
composición química, demodo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej;
tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos metacromáticos.
Pueden utilizarse uno o más colorantes.
Objetivos
1. Obtención de cultivos puros de microorganismos mediante estría en medio sólido y
mantenimiento de los mismos en tubos de agar inclinado.
2. Manejo del microscopio óptico de campo claro.3. Realización de preparaciones húmedas de suspensiones de microorganismos y
tinciones que nos permitirán observar la forma y tamaño de distintos microorganismos,
así como algunas estructuras especiales (esporas en Bacillus y corpúsculos
metacromáticos en Lactobacillus). También realizaremos tinciones diferenciales que nos
permitirán clasificar microorganismos en distintos grupos(tinción de Gram y de ácidoalcohol resistencia).
Materiales
Asa de siembra, placas de medio sólido y tubos de agar inclinado (Agar Nutritivo). Mechero
de alcohol. Microscopio óptico. Portaobjetos, cubreobjetos y colorantes. Suspensión de una
mezcla de microorganismos. Resiembras de microorganismos: Bacillus megaterium,
Escherichia coli, Micrococcus luteus, Serratia marcescens. Yogurtpreincubado a 37°C.
Agar Nutritivo (AN)
Extracto de levadura 2 g/l
Extracto de carne 1 g/l
Peptona 5 g/l
ClNa 5 g/l
Agar 20 g/l
pH 7,4
Procedimiento
1. AISLAMIENTO
A partir de una suspensión de microorganismos se realizarán estrías sucesivas en placas de
medio sólido. Las placas se incuban luego a 28ºC durante 24 horas. 7
2. RESIEMBRA
Mediante el asa de...