Coloraciones de gram

PREPARACIONES Y COLORANTES MICROSCOPICAS

INTRODUCCION
Las preparaciones para las observaciones microscópicas pueden ser de dos clases: preparados en fresco (la muestra no se encuentra fija a la lamina porta objeto) y preparado en seco (la muestra se encuentra fija a la lamina porta objeto).
Los colorantes son compuestos orgánicos que contienen radicales cromóforos, que producen color, ygrupos de auxocromos que forman sales. Se dice que un colorante es básico si la porción coloreada actúa como base o acido si actúa como acido.
Los colorantes ácidos se utilizan para colorear material básico, como por ejemplo el citoplasma, en tanto que los colorantes básicos colorean el núcleo.
Para colorear cualquier muestra, los colorantes deben disociarse en una solución acuosa en aniones ycationes. La capacidad de los colorantes para proporcionar color, depende de que tengan un grupo orgánico que proporcione color en el anión o en el catión, en los cuales se ha disociado.
OBJETIVOS
Al finalizar la práctica, el alumno ser a capaz de:
* Realizar observaciones microscópicas de preparados n fresco y en seco.
* Adiestrarse en los métodos de coloración más utilizados.
* Dibujarlo observado, manteniendo la proporción del objeto aumentado, con el campo microscópico.

MATERIALES Y METODOS
A. PREPARADOS EN FRECO Y EN SECO

1. Material: mucosa labial, sarro dentario, sangre, agua estancada, alcohol, laminas porta y cubreobjetos, asa de Koll, mondadientes, lancetas, microscopio.

2. Procedimiento:
2.1. Preparado en fresco:
a. En una lamina portaobjeto colocaruna gota de agua estancada y luego cubrir con una lamina cubreobjetos.
b. Observar en el microscopio. Empiece con los objetos de pequeño aumento.
c. Recomendaciones:
-Al realizar la observación del preparado en fresco puede Ud. verificar la importancia de los tornillos micrométrico y micrométrico.
-Utilice los diferentes objetivos a seco, y juegue con la iluminación.
-No emplee elobjetivo a inmersión.
d. Dibuje lo que observa, en un campo microscópico que tenga 6 cm. de diámetro, y en el cual exista proporción entre el objeto y el campo.

2.2. Preparado en seco:
Extensión
a. Colocar la sustancia examen (mucosa labial o sarro dentario), en el centro de una lamina portaobjeto.
b. Extender la muestra lo más uniformemente posible utilizando asa de Koll o mondadientes.Frotis
a. Tomas 2 laminas portaobjetos y en el tercio externo de una de ellas se colocara la muestra (una gota de sangre) sobre la cual se coloca el borde de la otra lamina de tal manera que forma un ángulo de 45º aproximadamente.
b. Después de observar que la muestra se extiende en todo el borde de la lámina superior, deslizar esta hacia el otro extremo mediante un movimiento rápido,tratando de obtener un frotis fino y uniforme.

B. COLORACIONES

1. Coloración Simple:
a. Material y reactivo: mucosa labial, alcohol, eosina, safranina, azul de metileno, hematoxilina, agua destilada, microscopio.

b. Procedimiento:
* Extensión o frotis (muestra: mucosa labial)
* Fijación (alcohol, calor moderado del mechero, medio ambiente)
* Colorear de la 1 a 5minutos (con un colorantes acido o básico)
* Lavar a chorro tenue y seca al medio ambiente o calor moderado.
* Observar empleando el objetivo de inmersión.

2. Coloración Doble:

a. Material o reactivo: los mismos de la coloración anterior especificando que se utiliza como colorante acido, la eosina y como colorante básico la hematoxilina.
b. Procedimiento
* Extensión ofrotis (muestra mucosa labial)
* Fijación (alcohol, calor moderado del mechero, medio ambiente)
* Colorear con hematoxilina de 3 a 5 minutos
* Colocar el preparado en agua destilada de 1 a 2 minutos.
* Colorear con eosina de 5 a 10 minutos
* Lavar con agua corriente
* Sacar y observar en el microscopio con el objetivo de inmersión.
3. Coloración Neutra:
a. Material y...