conteo de levaduras

Laboratorio de microbiología







Práctico N° 6

Crecimiento Microbiano
Métodos de Cuantificación



Fecha de entrega: 26 /05/2014Introducción

El crecimiento microbiano da como referencia al aumento del número de los microorganismos a lo largo del tiempo y no al aumento de tamaño de un MOs. El aumento del número de microorganismos permite la formación de colonias o de poblaciones. Es por esta razón que en microbiología el crecimiento se estudia por poblaciones y no en microorganismos individuales. Las bacterias sereproducen generalmente por fisión binaria, el resultado de esta reproducción son dos células hijas por cada célula madre, así, una célula se divide en dos, dos en cuatro y cuatro en ocho y así sucesivamente. (1)(4)

Para estudiar cuantitativamente la cinética del proceso de los procesos de fermentación es necesario disponer de métodos experimentales para poder determinar el modo de reproducción de lascélulas eucariótas o procariótas de interés.

Las células bacterianas se presentan en un cultivo en forma individual o en asociaciones débiles de pocos individuos, pudiendo ser dispersados en forma homogénea en el medio liquido de cultivo. (1)

En el caso de los hongos son organismos eucariotas se pueden distinguir por su morfología, mientras que la levadura se desarrollan por célulasindividuales fácilmente dispensables que se reproducen habitualmente por gemación (Proceso asexual, en el cual la célula progenitora reparte sus constituyentes celulares con una célula hija) en condiciones de pleno crecimiento, los mohos se reproducen de forma asexuada y sexuada mediante esporas.

Dada la diversidad de características que presentan los diferentes cultivos en las que influyen suspropiedades y composición de medio de cultivo se han desarrollado una variedad de métodos físicos y químicos para cuantificar las variaciones en el tiempo de una población de MOs.

Para los organismos unicelulares tales como bacterias y levaduras el crecimiento se puede medir en términos de dos parámentos diferentes: Cambio de masa celular y cambios en los números de las células, ambos tipos deexpresiones son equivalentes entre sí en cultivos que estén en crecimiento balanceado o equilibrado (en el que todos los componentes aumentan una misma proporción por unidad de tiempo).(2)

Métodos para la medición de masa celular (2)

Crecimiento de cualquier sistema biológico como el incremento ordenado de todos los elementos componentes de ese sistema, lo cual implica un aumento de la masacelular que eventualmente conduce a la multiplicación celular puede determinarse por medio de métodos directos de conteo de la población:

1) Determinación del peso húmedo: (3)
Se tara un tubo de centrífuga; se centrifuga el cultivo y se elimina el sobrenadante; se determina el peso del sedimento
2) Determinación del peso seco: (3) como el anterior, pero el sedimento se seca antes de ser pesado(105ºC, toda la noche), hasta peso constante. Las medidas de peso seco suelen representar el 10-15% de los valores de peso húmedo. Inconvenientes: método tedioso (requiere mucho tiempo

3) Determinación del nitrógeno total: técnica de micro-Kjeldahl.
4) Determinación de un componente característico: peptidoglucano, ADN, ARN, proteínas, ATP, clorofilas en organismos fotosintéticos, etc.Métodos indirectos de medida de la masa: (2)

1) Medida de consumo de nutrientes o de producción de algún metabolito por unidad de tiempo.
Ejemplos: consumo de oxígeno (QO2) y consumo de carbónico (QCO2), determinados por el respirómetro de Warburg. Producción de ácidos.
2) Métodos turbidimétricos (ópticos).
Consiste en la medición de la cantidad de luz dispersada o transmitida a través de...