Coprocultivo 2

OBJETIVO. El alumno manejar los procesos microbiologicos para la realizacion de coprocultivos. Comprender los momentos en los cuales debe como medico recurrir a esta tecnica. Identificar y diferenciar las bacterias patogenas de la flora normal del tracto gastrointestinal.
FUNDAMENTO TEORICO. El tracto gastrointestinal contiene una flora normal muy diversa, pero pertenecen a una sola familia debacterias, las Enterobacterias.
A) .Recoleccion de la muestra: Para enfermedades gastrointestinales es preferible el examen de heces frescas o tambien un raspado del ano con hisopo. La muestra debe ser refrigerada si no se va a cultivar enseguida.
B) .Examen directo: No es muy recomendable antes del cultivo, debido a que la morfología microscopica de las Enterobacterias es muy similarentre ellas y no permitira una diferenciacion entre ellas.
C) .Cultivo: Se deposita la muestra con un asa sobre un medio solido y se procede por estria multiple, se incuba a 37ºC por 24 a 48 horas
D) .Medios de cultivo: Agar sangre, Agar desoxicolato, EMB, Mac Conkey, SS, sulfito de bismuto, caldo de tetrationato.
La tecnica de coprocultivo es un procedimiento de rutina para aislar Salmonella,Shigella, y cepas comensales y patogenas de Escherichia coli.(en esta practica no analizaremos crecimiento de Yersinia enterocolerica . Para aislar Staphylococcus aureus es recomendable añadir una placa de agar sal y manitol, y para aislar Candida albicans otra de agar Sabouraud.
FLORA NORMAL | FLORA PATOGENA |
*** Bacteroides fragilis. | ***Salmonellatyphi |
*** Lactobacilus spp.( anaerobios). | ***Salmonella spp. |
*** Clostridium perfringens | ***Shigella spp. |
***Peptostreptococcus spp. | ***Escherichia coli (enterotoxina). |
***Proteus spp. | ***Klebsiella spp. |
***Candida spp.***Pseudomona spp. | ***Yersinia enterocolerica.***Vibrio cholerae. |

EXAMENES DE LOS CULTIVOS.
Agar MacConkey: Caracteristicas: Es un mediomoderadamente selectivo. Las sales biliares y el cristal violeta inhiben a la mayoria de las bacterias Gram-positivas y a algunas Gram- negativas. La fermentacion de lactosa hace virar el indicador a rojo.
Aspecto de las colonias:Los fermentadores tipicos de lactosa ( E. coli, Klebsiella y Enterobacter ) dan colonias rosas o rojas rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas. Las fermentadorasdebiles o lentas de lactosa (Citrobacter, Serratia) pueden dar colonias incoloras a las 24 hrs. Y rosadas a las 48 hrs. Proteus, Salmonella, Shigella y Yersinia, dan colonias incoloras.
Enterococcus forma pequeñas colonias.
Agar Salmonella-Shigella (SS): Caracteristicas: Es un medio selectivo para Salmonella y Shigella. La alta concentracion de sales biliares y citrato inhibe todas las bacteriasGram- positivas y muchas Gram- negativas, incluidos los coliformes. La fermetacion de lactosa hace virar el rojo neutro a rojo. El SH2 formado a partir del tiosulfato da un precipitado negro al reaccionar con hierro.
Aspecto de las colonias. Los fermentadores de lactosa estan bastante inhibidos y dan colonias rojas. Las colonias de Salmonella aparecen sin inhibir, transparentes con el centronegro. Las especies deShigella son mas o menos inhibidas y dan colonias transparentes sin centro negro. Las colonias deProteus son similares a las de Salmonella.
Agar EMB (eosina y azul de metileno): Caracteristicas: Es un medio selectivo, utilizado para aislar bacilos entericos Gram Negativos permite la diferenciacion de bacterias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. Este mediopermite diferenciar Salmonella y otros organismos lactosa negativos de organismos coliformes. Las colonias de Salmonella y Shigella son traslucidas, de color ambar o incoloras. Los coliformes que utilizan lactosa y/o sacarosa producen colonias de color azul o negro con centros oscuros y brillo metalico. Otros coliformes como Enterobacter presentan colonias mucosas de color rosa. Las cepas de...