Creatina Cinasa

FOSFATASA ALCALINA (ALP)

CREATINA CINASA - SL
Números de catálogo: 326-10 326-30 Presentación: R1: 1 x 100 mL, R2: 1 x 25 mL R1: 3 x 100 mL, R2: 1 x 75 mL

USO Para la determinación cuantitativa in vitro de creatina cinasa en suero. PRECAUCIONES Evite la ingestión y el contacto con la piel y los ojos. Vea la Hoja de Seguridad del Producto. REACTIVOS R1: Reactivo Amortiguador de CK-SL; R2:Reactivo de Sustrato de CK-SL El Reactivo de Trabajo contiene: 100 mmol/L de imidazol (pH 6.7 a 25°C), 30 mmol/L de fosfato de creatina, 20 mmol/L de glucosa, 20 mmol/L de N-acetilcisteína, 10 mmol/L de acetato de magnesio, 2 mmol/L de EDTA, 2 mmol/L de ADP, 5 mmol/L de AMP, 10 µmol/L de pentafosfato de di-adenosina, 2.0 mmol/L de NADP, >1.5 KU/L de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa y >2.5 KU/L dehexocinasa. ANTECEDENTES En todos los tipos de distrofia muscular y enfermedades que implican la destrucción de los tejidos musculares se detectan concentraciones séricas elevadas de creatina cinasa. En el caso de la distrofia muscular prograsiva, pueden presentarse concentraciones elevadas de CK antes de que aparezcan los síntomas clínicos. Se han detectado concentraciones elevadas de CK despuésde un infarto del miocardio, en casos de enfermedad cardiovascular aguda y en el síndrome de Reye. Enfermedades musculares neurógenas como la esclerosis múltiple y la poliomielitis no producen concentraciones elevadas de CK. La actividad de la CK está en sentido inverso a la actividad de la tiroides, por tanto, pudieran observarse concentraciones elevadas de CK en casos de hipotiroidismo. (1)Oliver (2) describió por primera vez el método para analizar la CK utilizando fosfato de creatina y difosfato de adenosina (ADP) como sustratos en vez de creatina y trifosfato de adenosina (ATP). Este método emplea las condiciones optimizadas propuestas por el Scandinavian Committee on Enzymes y la German Society for Clinical Chemistry (3, 4, 5). En el procedimiento, la N-acetilcisteína (NAC) es elactivador tilo y se agregan monofosfato de adenosina (AMP) y pentafosfato de p1,p5-di(adenosina-5’) (AP5A) para inhibir la interferencia causada por la actividad de la adenilato cinasa. PRINCIPIOS Las reacciones proceden de la siguiente manera:
CK Fosfato de creatina + ADP → Creatina + ATP HK ATP + D-glucosa → ADP + D-glucosa-6-fosfato G-6-PDH D-glucosa-6-fosfato + NADP
+

—→D-glucono-6-lactona 6-fosfato + NADPH + H+

El incremento en absorbancia a 340 nm debido a la formación de NADPH es directamente proporcional a la actividad de la creatina cinasa. Creatina Cinasa - SL – Página 1 de 5

PREPARACION DEL REACTIVO Los reactivos suministrados están listos para su uso. Puede prepararse un reactivo de trabajo al mezclar 4 partes de reactivo amortiguador de CK-SL (R1) con unaparte de reactivo sustrato de CK-SL (R2). ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO Los reactivos suministrados son estables hasta la fecha de caducidad especificada en las etiquetas a 2-8°C. Proteja el reactivo de la luz solar. El reactivo de trabajo es estable por 21 días a 2-8°C. DETERIORO DEL REACTIVO Las soluciones de reactivo debe ser claras. La turbidez indicaría deterioro. INSTRUMENTOS Puedeusarse cualquier instrumento con control de temperatura de ± 0.5°C que sea capaz de leer la absorbancia con exactitud, con una sensibilidad de 0.001 de absorbancia a 340 nm. El ancho de banda deberá ser de 10 nm o menos, la desviación de luz de 0.5% o menos y la exactitud de longitud de onda dentro de 2 nm. RECOLECCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA La muestra de elección es suero fresco, claro y nohemolizado. Los anticoagulates diferentes a la heparina interfieren con la actividad de la CK (7). La actividad de la CK en suero se reduce rápidamente conforme aumenta la temperatura y la muestra deberá de separarse y enfriarse a 2-8°C tan pronto como sea posible. La CK Macro, o mitocondrial, es la izoenz10% a partir del control. No se encontró interferencia importante por ictericia a niveles...