Cromatografía

Cromatografía: Aislamiento y purificación de Clorofila y Carotenos de espinaca.

1. Objetivos

* Conocer la técnica para aislar y purificar clorofila y carotenos, la cromatografía.
* Purificar y aislar clorofila y carotenos de la hoja de espinaca por medio de la cromatografía fina y la cromatografía en columna.
* Utilizar correctamente los instrumentos implicados en los dostipos de cromatografía.

2. Resultados.

Tabla 1. Pesos obtenidos de los tubos de ensayo inicialmente.
Tubo de ensayo | Peso |
1 | 12,461 |
2 | 10,855 |
3 | 12,694 |
4 | 12,810 |
5 | 12,695 |

Cromatografía en columna:
Tabla 2. Observaciones del color de las muestras.
Tubo de ensayo | Color de la muestra |
1 | Incolora |
2 | Naranja |
3 | Verde Claro |
4 | VerdeFuerte |
5 | Verde |

Distancia entre línea y línea de la placa:
4,3 cm

Distancia de la línea inferior hasta cada una de las manchas obtenidas:
Tabla 3. Distancia recorrida de la mancha y Factor de reparto.
Mancha | Muestra | Distancia | RF |
1 | 2 | 1,9 | 0,44 |
2 | 3 | 1,9 | 0,44 |
3 | 3 | 1,75 | 0,40 |

Calculo de los valores de RF:

RF=Distancia recorrida por laManchaDistancia recorrida del eluyente

RF 1=1,94,3=0,44

RF 2=1,94,3=0,44

RF 3=1.754,3= 0,40

3. Análisis de resultados

El objetivo era realizar los dos tipos de cromatografía, la cromatografía en columna, y la cromatografía en capa fina. Para comprender correctamente el proceso llevado a cabo, es importante saber que es la cromatografía. La Cromatografía es una técnica empleada para laseparación de sustancias. Consiste en separar dos o más compuestos mediante la distribución en dos fases: una estacionaria y la otra móvil. La cromatografía en columna se basa en la solubilidad y en la adsortividad de los compuestos en la fase estacionaria y en la fase móvil, la estacionaria debe ser insoluble en la móvil, para esta práctica se utilizó la sílica (SiO2) en polvo fino, éste compuestoactúa como adsorbente y como filtro que retiene partículas sólidas; éste tipo de cromatografía se distingue por el uso de una columna cilíndrica de vidrio a la cual se le agrega el adsorbente (sílica), en ese momento es cuando se lleva a cabo la fase estacionaria.[1] Los compuestos que se quieren separar se adhieren sobre las partículas de la fase estacionaria, mediante diferentes fuerzasintermoleculares que dependen de su estructura y polaridad. La fase móvil se llevó a cabo al verter el solvente, evitando que se seque el adsorbente sin dañarlo. La segunda es la cromatografía de capa fina, ésta es una técnica muy importante para para la separación rápida de pequeñas cantidades de sustancia,[2] del mismo modo que la cromatografía en columna esta también se lleva a cabo en dos fases laestacionaria y la móvil, la diferencia es que en esta técnica la fase móvil, que sería el solvente, sube al adsorberse, no como en la otra que baja. Se debe tener en cuenta que los compuestos que se aíslan en la cromatografía en columna y capa fina son: clorofila-a que sería el verde intenso, clorofila-b la verde, los carotenos que son el amarillo claro, y las xantofilas que serían el amarilloanaranjado, tabla 2. Se debe tener presente que éstas sustancias presentan grados distintos de solubilidad en disolventes apolares, lo que permite su separación. Para obtener, los carotenos se usó el hexano como disolvente, debido a que el caroteno tiene una polaridad similar al del hexano, con la clorofila-b, donde se utilizó el hexano:acetona 70:30, de la misma manera con la clorofila-a, cuyodisolvente fue acetona:metanol 80:20. En estos términos las más solubles se desplazaran a mayor velocidad pues acompañan más fácil al disolvente a medida que este baja.[3] Además, los 4 compuestos que se separan son de carácter apolar, aunque su grado de polaridad varia en grado se composición química, de este modo tenemos que el mas polar serán los carotenos, después vendrán la clorofila a y las...