Cromatografía

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA DE
PIGMENTOS

Objetivos

Conocer la forma de extraer diversos pigmentos vegetales (clorofilas, carotenos y xantofilas) y saber separarlos mediantecromatografía en columna. Finalmente saber comprobar la purificación por cromatografía en capa fina (CCF).

Procedimiento Experimental

Resultados y Discusión

Primeramente hacemos pasar por la faseestacionaria un eluyente apolar [aunque no completamente] (formado por 5ml de acetona y 50ml de éter de petróleo], entonces observamos como el β-caroteno se desplaza por la fase móvil mientras que laclorofila [sus distintos tipos] quedan retenidos en la fase estacionaria ya que son sustancias polares, como el β-caroteno es apolar (muy poco polar) si que se ve desplazado por el eluyente apolar, ya que noqueda adsorbido en la fase estacionaria.
Seguidamente hacemos correr por la fase estacionaria un eluyente muy polar, como es la acetona, desplazando así todas las sustancias retenidas en la faseestacionaria [los distintos tipos de clorofila] y como no, también arrastra a una gran velocidad el β-caroteno.
Por último, comentar que cada vez que veíamos que una de las distintas sustancias seacercaba al final de la columna, cambiábamos el vaso de precipitados por un tubo de ensayo para así recogerla, de esta forma recogimos el β-caroteno y la clorofila [una de sus formas], esto nos servirápara realizar la Cromatografía de Capa Fina.

·Para determinar la concentración de las sustancias extraídas podemos preparar unos patrones de concentración conocida de cada una de las 2 sustancias ymedir la Absorbancia de dichos patrones en un espectrofotómetro de UV-visible y realizar las rectas de calibrado de cada sustancia; entonces después de separarlas en nuestra columna cromatográficamediríamos la Absorbancia de cada una de nuestras muestras y despejando el valor de la concentración (M) en la ecuación de cada una de las rectas de calibrado, según corresponda, obtendremos la...