Cromatografia En Capa Fina

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Objetivo:
* Separar mediante cromatografía en capa fina (delgada) los componentes de una mezcla de lípidos.
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Introducción.
Concepto de cromatografía: La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales esestacionaria y la otra una fase móvil. Varios tipos de cromatografía son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: sólido-liquido (capa fina, papel o columna), liquido-liquido y gases-liquido ( fase vapor ).
Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada también activa,que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra, denominada fase estacionaria. La fase móvil puede ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido.
Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente, todas las sustancias puedenser adsorbidas, unas con más facilidad que otras. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía. (1)
La cromatografía en capa fina, TLC (Thin layer chromatograhy) es una técnica cromatográfica. La fase estacionaria es una capa, uniforme, de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte. Los requisitos son unabsorbente (por ejemplo silica gel)), placas, un dispositivo que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de absorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas.
La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos polar que la fase estacionaria, deforma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.
La elección del eluyente depende del componente que se va a separar y del material en que la separación se lleva a cabo.
Eluyentes más comunes para cromatografía en capa fina. (2)
* -éter de petróleo
* -tolueno
* -Dietil-éter, t-butil-éter
* -diclorometano
* -acetato de etilo
*-n-pentano, n-hexano
* -ciclohexano
* -tetracloruro de carbono
* -éter dietílico
* -cloroformo
* -acetona
* -iso-propanol
* -etanol
* -metanol
* -ácido acético

Localización de sustancias
Si los compuestos separados no son coloreados es necesario revelar la posición de dichos compuestos, para ello existen dos tipos de métodos:
Métodos químicos. Métodos físicos.Métodos químicos Consisten en realizar una reacción química entre un reactivo revelador y los componentes separados, para ello se pulveriza la placa con los reactivos reveladores.
Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos coloreados con los componentes orgánicos (con tonos amarillo-marrón), pero las manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente señalarlas manchas aparecidas.
Otro reactivo revelador bastante utilizado es el ácido sulfúrico, que reacciona con los componentes orgánicos produciendo manchas negras.
También es utilizado el permanganato potásico, que deja unas manchas de color amarillo. El tamaño de las manchas no está relacionado con la cantidad de componente separado.
Además de estos reveladores generales, existen otrosespecíficos: dinitrofenilhidracina (para aldehídos y cetonas). Verde de bromocresol (para ácidos carboxílicos). Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas). Ninhidrina (para aminoácidos) y Radaina B (lípidos).
Métodos físicos. El más común consiste en añadir al adsorbente un indicador fluorescente. De tal forma que al colocar la placa bajo una lámpara ultravioleta, y dependiendo del indicador y de la...