CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO
Páginas: 15 (3564 palabras)
Publicado: 10 de octubre de 2015
UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA
LA MOLINA
ESCUELA DE POST-GRADO
ESPECIALIDAD DE TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS
Cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC)
CURSO : ANÁLISIS POR INSTRUMENTACIÓN
PROFESOR : ING. REPO-CARRASCO
ALUMNOS : HERNÁNDEZ CENZANO, ALBERTO
NOLAZCO CAMA, DIANA
La Molina, Abril del 2005
CROMATOGRAFIALIQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO (HPLC)
En las primeras etapas del desarrollo de la cromatografía de líquidos, los científicos observaron que se podían conseguir grandes aumentos de la eficiencia de la columna disminuyendo el tamaño de las partículas de rellenos. Sin embargo, no fue hasta los finales de los años sesenta cuando se desarrollo la tecnología adecuada para producir y utilizar rellenos detamaño de las partícula pequeños (3 a 10 um) Esta tecnología requiere una instrumentación sofisticada para poder trabajar a altas presiones, lo que contrasta notablemente con las simples columnas de vidrio de la cromatografía de líquidos clásica cuyo caudal se debe a la gravedad. Para distinguir estos procedimientos m{as nuevos de los métodos básicos, que todavía reutilizan con fines preparativos, seemplea la denominación de cromatografía de líquidos de alta eficiencia. (HPLC).
Mediante el uso de materiales de soporte de tamaño pequeño y uniforme se pueden lograr grandes superficies de contacto que llevan a obtener separaciones eficientes en columnas cromatográficas, pero las columnas empacadas con tales materiales presentan una gran resistencia al flujo del líquido por lo que se requierenpresiones para forzar las fases móviles a través de ellas. La HPLC ha llegado ha ser una técnica muy usada, complementaria a la cromatografía de gases (Kirk 1996).
La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) es un procedimiento que permite muy buenas separaciones dentro de un gran número de sustancias en un tiempo corto (orden de magnitud: de min hasta 1 h). Mientras que la cromatografíagaseosa (GC) sólo permite separar sustancias que se volatilizan a temperaturas elevadas sin degradarse o de las cuales se obtienen derivados volátiles reproducibles, la HPLC ofrece la posibilidad de separar sustancias o grupos de sustancias poco volátiles o térmicamente inestables o que sólo se transforman con dificultad en sus derivados volátiles. Puesto que la fase móvil, como indica el nombrede HPLC, es un líquido, es condición imprescindible que la muestra sea soluble en un disolvente. Con excepción de las redes de alto peso molecular, esta condición se cumple para todas las sustancias orgánicas y las inorgánicas iónicas.
De forma análoga a la GC, la HPLC permite obtener resultados tanto cuantitativos como cualitativos. Las separaciones se optimizan variando las dimensiones de lacolumna, la constitución química de la superficie del material de relleno, su tamaño de grano, las características del poro y la constitución del eluyente (Matissek et al., 1998)
Modo de separación e influencia de la temperatura
En HPLC existen dos modos posibles de separación:
a) Elusión isocrática:
En la elusión isocrática la composición de la fase móvil permances constante, es decir, la fuerzade elusión es la misma a lo largo de todo el proceso cromatográfico. Solo se necesita la bomba en el aparato de HPLC.
b) Elusión en gradiente:
La composición de la fase móvil, es decir, la composición durante el proceso cromatográfico, se modifica. Esta modificación puede ser lineal, no lineal o en etapas. Para programar los cambios de gradiente de la fase móvil se necesitan los denominadossistemas de gradientes (mezcla de gradientes de alta o baja presión con ayuda de una bomba adicional por cada componente a eluir o por medio de sistemas de cámaras o válvulas de mezcla).
La termostatización de la columna es menos importante en HPLC que en GC. Por ello, únicamente los aparatos mas caros tienen un horno. En la mayor parte de los disolventes, un aumento de la temperatura implica un...
LA MOLINA
ESCUELA DE POST-GRADO
ESPECIALIDAD DE TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS
Cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC)
CURSO : ANÁLISIS POR INSTRUMENTACIÓN
PROFESOR : ING. REPO-CARRASCO
ALUMNOS : HERNÁNDEZ CENZANO, ALBERTO
NOLAZCO CAMA, DIANA
La Molina, Abril del 2005
CROMATOGRAFIALIQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO (HPLC)
En las primeras etapas del desarrollo de la cromatografía de líquidos, los científicos observaron que se podían conseguir grandes aumentos de la eficiencia de la columna disminuyendo el tamaño de las partículas de rellenos. Sin embargo, no fue hasta los finales de los años sesenta cuando se desarrollo la tecnología adecuada para producir y utilizar rellenos detamaño de las partícula pequeños (3 a 10 um) Esta tecnología requiere una instrumentación sofisticada para poder trabajar a altas presiones, lo que contrasta notablemente con las simples columnas de vidrio de la cromatografía de líquidos clásica cuyo caudal se debe a la gravedad. Para distinguir estos procedimientos m{as nuevos de los métodos básicos, que todavía reutilizan con fines preparativos, seemplea la denominación de cromatografía de líquidos de alta eficiencia. (HPLC).
Mediante el uso de materiales de soporte de tamaño pequeño y uniforme se pueden lograr grandes superficies de contacto que llevan a obtener separaciones eficientes en columnas cromatográficas, pero las columnas empacadas con tales materiales presentan una gran resistencia al flujo del líquido por lo que se requierenpresiones para forzar las fases móviles a través de ellas. La HPLC ha llegado ha ser una técnica muy usada, complementaria a la cromatografía de gases (Kirk 1996).
La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) es un procedimiento que permite muy buenas separaciones dentro de un gran número de sustancias en un tiempo corto (orden de magnitud: de min hasta 1 h). Mientras que la cromatografíagaseosa (GC) sólo permite separar sustancias que se volatilizan a temperaturas elevadas sin degradarse o de las cuales se obtienen derivados volátiles reproducibles, la HPLC ofrece la posibilidad de separar sustancias o grupos de sustancias poco volátiles o térmicamente inestables o que sólo se transforman con dificultad en sus derivados volátiles. Puesto que la fase móvil, como indica el nombrede HPLC, es un líquido, es condición imprescindible que la muestra sea soluble en un disolvente. Con excepción de las redes de alto peso molecular, esta condición se cumple para todas las sustancias orgánicas y las inorgánicas iónicas.
De forma análoga a la GC, la HPLC permite obtener resultados tanto cuantitativos como cualitativos. Las separaciones se optimizan variando las dimensiones de lacolumna, la constitución química de la superficie del material de relleno, su tamaño de grano, las características del poro y la constitución del eluyente (Matissek et al., 1998)
Modo de separación e influencia de la temperatura
En HPLC existen dos modos posibles de separación:
a) Elusión isocrática:
En la elusión isocrática la composición de la fase móvil permances constante, es decir, la fuerzade elusión es la misma a lo largo de todo el proceso cromatográfico. Solo se necesita la bomba en el aparato de HPLC.
b) Elusión en gradiente:
La composición de la fase móvil, es decir, la composición durante el proceso cromatográfico, se modifica. Esta modificación puede ser lineal, no lineal o en etapas. Para programar los cambios de gradiente de la fase móvil se necesitan los denominadossistemas de gradientes (mezcla de gradientes de alta o baja presión con ayuda de una bomba adicional por cada componente a eluir o por medio de sistemas de cámaras o válvulas de mezcla).
La termostatización de la columna es menos importante en HPLC que en GC. Por ello, únicamente los aparatos mas caros tienen un horno. En la mayor parte de los disolventes, un aumento de la temperatura implica un...
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