Cromatografia Liquida

Principios de la técnica
En la cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que contiene a la fase fija. La separación cromatografía en HPLC es el resultado de las interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos de alto rendimiento(HPLC, de high-performance liquid chromatography) no está limitada por la volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra; es decir la temperatura como parámetro no nos limita el análisis de la muestra.
La distribución entre las dos fases se debe a la interacción, en diferente proporción, de las moléculas de soluto con las moléculas de cada fase.
FUERZAS INTERMOLECULARES
FUERZAS IONICAS: atracciónelectrostática de iones con carga opuesta para separar aniones se requiere una FE catiónica y viceversa.
ATRACCIONES POLARES: puede tratarse de interacciones de moléculas polares (alcoholes, cetonas, aldehídos) o polarizables (benceno, tolueno, naftaleno). Para su separación se requerirá que la FM sea no polar o poco polar y la FE sea polar.
INTERACCIONES DISPERSIVAS: se originan entre cadenashidrocarbonadas y sustancias polares como consecuencia de asimetrías electrónicas instantáneas.
TIPOS DE CROMATOGRAFIA
CL CONVENCIONAL

La cromatografía líquida considerada como clásica se lleva a cabo en columnas abiertas y en ella la fase móvil fluye por gravedad (figura 12.1.a.) o mediante la aplicación de vacío, con un dispositivo como el representado en la figura 12.1.b.

Como regla de usocomún, la longitud de la columna debe ser, por lo menos, equivalente a diez veces su diámetro, de forma que una columna típica puede ser de 20 cm de largo y entre 1 y 2 cm de diámetro. Para obtener la máxima eficacia, el relleno de la columna deberá estar constituido por partículas de tamaños similares y uniformemente empaquetada, evitando que se formen canales. De este forma, se minimiza la distorsiónde las bandas cromatográficas. Para conseguirlo, la fase estacionaria suele adicionarse a la columna en forma de suspensión con una porción de la fase móvil, dejando que se asiente lentamente, proceso que se facilita en ocasiones mediante una suave agitación.
La adición de la muestra por la parte superior de la columna se hará en forma de disolución concentrada, muy cuidadosamente para no removerla fase estacionaria. Con esta finalidad, suele colocarse en la parte superior de ésta una fina capa de arena, lana de vidrio o papel de filtro.
CROMATOGRAFIA DE ADSORCION (CLS)

Las especies químicas (átomos, moléculas, iones) que están en la capa superficial de un sólido no tienen todas sus cargas eléctricas compensadas y como consecuencia de ello, presentan fuerzas residuales, o sitiosactivos, que pueden actuar sobre los componentes del fluido que baña su superficie, originando fenómenos de adsorción. Las fuerzas responsables de la adsorción dependen de la naturaleza de la superficie y de la estructura de las especies adsorbidas.
Adsorbentes: Aunque se ha utilizado una gran cantidad de sólidos como fases estacionarias en CLS, las más empleadas son la gel de sílice y la alúmina. Lagel de sílice, (SiO2.xH2O), también llamado ácido silícico, es un material que se obtiene por precipitación en medio ácido de soluciones de silicato sódico. El área superficial, el tamaño de poro y el pH de la superficie dependen de las condiciones de precipitación. Así, a pH 3.7. la superficie específica es 830 m2/g, mientras que a pH 5.7, el valor obtenido es 348 m2/g.

Disolventes. En CLS eldisolvente compite con los solutos por los centros activos de la fase estacionaria, por lo que la elución puede describirse como un desplazamiento del soluto por el disolvente. Así, cuanto más intensa sea la interacción disolvente-fase estacionaria, más tiempo pasará el soluto en la fase móvil y, en consecuencia, más rápidamente será eluido. De hecho, la capacidad relativa de los distintos...