Cromatografia planar

CROMATOGRAFIA PLANA

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL (PC)

La cromatografía en papel (1944, Consden, Gordon y Martin) es una técnica analítica importante y de gran aplicación para la separación e identificación de microcantidades de substancias. Las especies separadas aparecen como manchas después de rociar el papel con algún reactivo formador de color apropiado para el caso.

Existen variasformas de realizar cromatografía en papel. El método clásico es como sigue (figura 16):

a) Se satura un trozo de papel filtro con agua.
b) Se coloca una gota de la mezcla a analizar sobre el papel.
c) El papel se sumerge en una cuba que contiene un solvente orgánico.
d) A medida que el solvente se mueve, va arrastrando y separando los componentes de la mezcla. A esta operación se le conocecomo desarrollo.
e) Si es necesario, el papel se rocía con un reactivo formador de color que haga aparecer a los distintos componentes de la mezcla. A esto se le llama revelado.

El solvente orgánico en la cuba es la fase móvil, mientras que el agua con la que se saturó el papel es la fase estacionaria. El solvente orgánico asciende por el papel. Cada componente de la mezcla XYZ tiene uncoeficiente de reparto diferente entre la fase orgánica y la fase acuosa, por lo que X, Y y Z se separan a medida que el solvente se desplaza por el papel.

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (CCF)

Ismailov y Scraiber utilizaron láminas de vidrio para colocar capas muy delgadas de alúmina y luego aplicaron extractos vegetales, dando así la primera forma de Cromatografía de Capa Fina. Egon Stanl (1956)dió el nombre de Cromatografía de Capa Fina (TLC, CCF).
Este tipo de cromatografía planar, es una técnica relacionada con la HPLC, pero con su propia especificidad. Aunque estas dos técnicas son experimentalmente diferentes, el principio de separación y la naturaleza de las fases es la misma. Debido a la reproducibilidad de las películas y las medidas de concentración, la CCF es ahora un métodocuantitativo de análisis que puede efectuarse en instrumentos modernos. El desarrollo de aplicadores automáticos y densitómetros ha llevado a la nano –CCF a ser una técnica simple con alta capacidad
Las placas, se recubren con una delgada capa (100-200 µm) de fase estacionaria, la cohesión de la fase y su enlazamiento al soporte se asegura introduciendo un ligando orgánico o un mineral cuandose deposita la película. El volumen de la muestra debe ser pequeño (unos pocos nL o µL) y se colocan en pequeños puntos de 1-3 mm de diámetro. La muestra puede aplicarse manualmente o usando un capilar de extremo plano (fig. 17). La aplicación puede hacerse también a manera de una banda horizontal de unos cuantos milímetros depositada por rociado automático de la muestra.
La placa se coloca enuna cámara cubierta, que contiene una pequeña cantidad de fase móvil, la cual esta en contacto con la placa con la parte donde se colocó la muestra sumergida a una profundidad de unas cuantos milímetros. La fase móvil migra por capilaridad a través de la fase estacionaria, induciendo a los componentes de la muestra a migrar de manera diferencial. Una vez que el solvente ha recorrido la distanciaadecuada (unos cuantos centímetros) la placa se retira de la cámara y la fase móvil se evapora.
Fundamentos.
La separación de mezclas de moléculas mediante CCF se basa en el principio del reparto entre dos fases. En general, se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea separar (muestra) interaccione con un medio de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio (lafase móvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para "lavar" (eluír) a las moléculas en la muestra. Debido a que las distintas moléculas en la muestra presentan diferente coeficiente de reparto, la fase móvil "lavará" a los componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que "prefieren disolverse" en la fase móvil serán eluídos más rápido que los...