Cromatografia

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¿Y todo lo que hemos visto hasta ahora, sobre tipos de moléculas (señalizadores, receptores, citoesqueleto, DNA, ribosomas, etc.) cómo le hacen para estudiarlas? - ¿Qué tipo de moléculas son?
- ¿Cómo las identifican? - ¿Cómo pueden detectar moléculas tan pequeñas? - ¿Qué aparatos se utilizan?

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Separación de proteínas
Métodos físicos usados para separar y analizar mezclascomplejas. Uno de los métodos más poderosos de separación es la cromatografía.

Esta técnica varía, dependiendo de el aparato, por ej. Cromatografía en columna Cromatografía en papel Y con base al principio físico, existen por ej.: Intercambio iónico, Partición de fases (ó polaridad) Exclusión por tamaño.

http://www.micromountain.com/sci_diagrams/sci_app/sci_app_pages/ctography_anim.htm

Roma-2010 Principio de la cromatografía
Todos éstos tipos, se basan en un sistema con: - una fase móvil (generalmente líquida ó gas) - una fase estacionaria (perlas, papel, gel, etc.) Al interaccionar las dos fases, por el movimiento diferencial de las dos fases, en el que el flujo de una solución ó gas (fase móvil) que se percola a través de una fase adsorbente (fase estacionaria) Estas técnicas seutilizan para separar, purificar e identificar solutos.

http://www.rpi.edu/dept/chem-eng/BiotechEnviron/CHROMO/chromintro.html
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Algunos tipos de cromatografía.

Ventajas. Se puede: - Separar mezclas complejas (drogas, plásticos, saborizanes, alimentos, pesticidas, - Utilizar muestras muy pequeñas - Los compuestos separados se colectan independientemente - Alta resolución y gradode precisión
http://kinardf.people.cofc.edu/221LabCHEM/CHEM221L%20Gas%20Chromatography%20of%20Methyl%20Salicylate.htm

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Ventajas
Estrategia es hacer interaccionar una mezcla con un material que tenga capacidad de retener algunos compuestos sobre otros.

Ventajas. Se puede: - Separar mezclas complejas (drogas, plásticos, saborizanes, alimentos, pesticidas, - Utilizar muestras muypequeñas - Los compuestos separados se colectan independientemente - Alta resolución y grado de precisión

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Cromatografía en gel
Fase no-móvil es un coloide

Coloide: una mezcla homogenea con partículas dispersas en suspensión en un líquido. Está en una fase semi-sólida. También se conoce como cromatografía de exclusión molecular.
Las moléculas de la solución problema seseparan con base en su tamaño y forma. Las moléculas pequeñas, se pueden difundir entre los poros de la matriz y son retrasadas en su trayectoiria, mientras que las grandes son excluidas y pasan más rápidamente. La forma tambien modifica la velocidad de trayectoria.
http://sbio.uct.ac.za/Sbio/postgrad/modules/GRD/chromatography/gf1.php

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Cromatografía en gel
Gel: Es un coloide en formasemi-sólida)
Es un método que permite la separación, identificación y caracterización de macromoléculas con base en: •Tamaño •Carga eléctrica y otras propiedades físicas •Actividad enzimática •Reconocimiento antigénico Ventajas: • Condiciones de operación amables, • Alta resolución • Amplia gama de buffers que pueden usarse • Puede usarse para estimar el tamaño de moléculas • Existe una ampliagama de poros de geles Ver esta Animación
http://www.wiley.com/college/fob/quiz/quiz05/5-6.html
http://sbio.uct.ac.za/Sbio/postgrad/modules/GRD/chromatography/gf1.php

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Tipos de geles
Existen varios tipos de geles, pero los mas utilizados son:

• • • •

Acrilamida Agarosa Almidón Silica

La elección del material a usar para el gel, dependerá del tipo de molécula a estudiarRoma-2010

Cuando para separar las moléculas utilizamos un campo eléctrico es: Permite la migración de las Moléculas en base a su carga eléctrica bajo la influencia de un campo eléctrico

Electroforesis

Cuando para separar las moléculas utilizamos solventes de polaridad variable es:

Cromatografía

Permite la migración de las Moléculas en base a su carga eléctrica bajo la influencia...
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