cromatografia

1 - Cromatografía – Definición
Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes, los cuales se distribuyen entre dos fases , una de las cuales se denomina fase móvil y la otra fase estacionaria, que se mueven una con respecto de laotra manteniendo un contacto íntimo.
La muestra se introduce en la fase móvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la móvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separación. Si un componente está la mayor parte del tiempo en la fase móvil el producto se mueverápidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho más lenta. Después de haber pasado los componentes por la fase estacionaria y haberse separado pasan por un detector que genera una señal que puede depender de la concentración y del tipo de compuesto.

2 - Principios y Fundamentos
Como dijimos anteriormente lacromatografía permite separar, identificar y determinar los componentes químicos en mezclas complejas y se basan en la utilización de dos fases, una móvil y una estacionaria. Siendo la estacionaria por ejemplo un líquido adherido sobre un soporte solido o un gel. Esta fase se deposita sobre una columna, rellenándola o recubriéndola interiormente en forma de película, la fase móvil es generalmente un gas oun líquido.
Las técnicas cromatográficas pueden clasificarse según diferentes criterios, atendiendo al modo como las fases se ponen en contacto y atendiendo al fundamento del proceso de separación. En este último caso en definitiva se trata de la naturaleza de las fases y de los tipos de interacciones que tienen lugar entre los solutos y las fases utilizadas.
Según la naturaleza de las fasespuede clasificarse en :

Cromatografía de adsorción
La fase estacionaria solida retiene a los solutos por un doble efecto de adsorción física y química. Las interacciones implicadas son del tipo de fuerzas de Van der Waals.
Cromatografía de Exclusión
Es útil para la separación de proteínas. La Cromatografía de exclusión molecular, también llamada de filtración en gel, separa en función de sutamaño. La matriz de la columna está formada por un polímero entrecruzado con poros de tamaños determinados. Las proteínas de mayor tamaño migran más deprisa a lo largo de la columna que las de pequeño tamaño, debido a que son demasiado grandes para introducirse en los poros de las bolas de polímero y por tanto siguen una ruta más corta y directa a lo largo de la longitud de la columna. Lasproteínas de menor tamaño, entran en los poros y su marcha a lo largo de la columna es más lenta.
Cromatografía de intercambio iónico
La Fase Estacionaria  es una resina de intercambio iónico que contiene grupos cargados, teniendo la propiedad de separar especies ionizadas (Cationes o Aniones); la Fase Móvil es generalmente una solución amortiguadora de pH. En proteínas la cromatografía de intercambioiónico se basa en las diferencias en signo y magnitud de la carga eléctrica neta de las proteínas a un valor de pH determinado. La separación de la proteína de la matriz cargada puede obtenerse gradualmente cambiando el pH y/o la concentración salina de la fase móvil, de tal forma que se genere un gradiente de concentración.
Cromatografía de Afinidad

Se trata de un tipo especial de cromatografíade adsorción sólido-líquido en la que la sustancia de naturaleza bioquímica denominadas ligandos de afinidad y enlazados químicamente en soportes sólidos adecuados, retienen a los solutos (analitos), también de naturaleza bioquímica, de manera reversible y selectiva. Permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando. En este caso, las...