cromatografia

CROMATOGRAFÍA: AISLAMIENTO, PURIFICACÍON E IDENTIFICACIÓN DE CLOROFILA
Y CAROTENOS DE LAS HOJAS DE ESPINACA



RESUMEN

En esta práctica se realizó cromatografía en columna (CC) y cromatografía de capa fina (CCF) donde se pretendió aislar, purificar e identificar los pigmentos de las hojas de espinaca y con esto calcular el coeficiente Rf, el cual nos ayudó a identificar que compuestosencontramos tomando como referencia una muestra de una compuesto conocido.

En la CC se utilizó una columna de vidrio que fue llenada con una fase estacionara o “slurry” (2g de sílica y 4mL de hexano), después se fueron adicionando pequeñas cantidades de hexano (fase móvil) que se dejaron fluir para asegurar el empaquetamiento del adsorbente, teniendo cuidado con no dejar secar la sílica. Traseste procedimiento fue agregado el extracto de espinaca, en donde los compuestos que se pretendieron separar se fueron adhiriendo a la fase estacionaria por sus fuerzas intermoleculares las cuales dependen de su estructura y polaridad, así al ser la sílica un compuesto polar los compuestos más polares se unirán con mayor fuerza a esta. Debido a que cada uno de los compuestos de la mezclaestableció interacciones diferentes al adicionar el solvente estas eluyeron a través de la columna a



diferentes velocidades y se consiguió su separación; los cuales fueron recogidos en diferentes fracciones. Estas fracciones fueron posteriormente analizadas en cromatografía de capa fina.

En la CCF se preparó adecuadamente la placa de cromatografía (fase estacionaria) donde se señalaron 3puntos, uno era para el punto de referencia y los otros dos correspondían a las muestras 1 y 3 extraídas de la cromatografía en columna. Con un capilar de punta fina se recolecto cada muestra y fue agregada a sus puntos correspondientes. Una vez finalizada esta parte, en un beaker se agregó una solución de 70:30 hexano: acetona y se introdujo en este la placa, se esperó unos minutos para que el hexanoascendiera por esta y llegar hasta el frente del disolvente, visualizando así cada uno de los compuestos separados de las muestras.

1. INTRODUCCION

El botánico ruso Mijaíl Tswett,(1872-1919) empleó por primera vez en 1906 el término "cromatografía" (que proviene del griego χρομα y γραφω que significan respectivamente chroma "color" y graphos "escribir").

A comienzos del año 1903, MijailTsvet usó columnas de adsorción de líquidos para separar pigmentos vegetales (por ejemplo, clorofilas). Las disoluciones se hacían pasar a través de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio, que finamente dividido de un material poroso que interacciona de forma diferente con los componentes de la mezcla, de forma que éstos se separaban en distintas bandas coloreadas a lo largo de lacolumna.

Una de las técnicas más empleadas en la separación de sustancias es la cromatografía. Esta técnica consiste en la separación de dos o más compuestos o iones mediante la distribución entre dos fases, una de ellas se denomina la fase estacionaria y la otra es la fase móvil. Existen varias clases de cromatografías como la cromatografía de capa fina y cromatografía de columna1.

La CC esuna técnica de purificación, puesto que permite aislar los compuestos deseados de una mezcla2. Esta emplea una columna cilíndrica de vidrio empacada o rellena con el adsorbente (fase estacionaria). Durante el proceso se debe mantener un flujo constante de solvente (fase móvil) a través de la fase estacionaria y evitar que se seque. Inicialmente los componentes de la mezcla se adsorben sobre laspartículas del sólido, a medida que se adiciona el solvente ellas eluyen a través de la columna a diferentes velocidades, dependiendo de la afinidad relativa por el adsorbente y por el solvente2.

Un factor importante en la cromatografía es la elección apropiada de la fase móvil. En ocasiones es suficiente con un solo solvente, pero en otros casos es conveniente emplear mezclas de solventes...