cromatografia

CROMATOGRAFIA
PRINCIPIOS Y APLICACIONES
Rafael Gómez-Ullate Ricón
Alonso Serrano Álvarez

1. Conceptos básicos sobre cromatografía

Antes de definir los conceptos básicos para entender los distintos tipos de separaciones
cromatográficas, haré una breve introducción y una explicación general sobre la cromatografía. Los
conceptos que más adelante se explican se refieren a la cromatografíaen columna, sin embargo, es
importante señalar que como los equilibrios en los que se basan los dos tipos de cromatografía son
idénticos, la teoría desarrollada para la cromatografía en columna se adapta también fácilmente a la
cromatografía plana.

1.1. Breve introducción a la cromatografía
La cromatografía es un método muy utilizado en todas las ramas de la ciencia y que permite laseparación, identificación y determinación de los componentes químicos en mezclas complejas. Ningún
otro método de separación es tan potente y de aplicación tan general como la cromatografía.

1.2. Descripción general de la cromatografía
Es difícil definir rigurosamente el término de cromatografía, ya que se ha aplicado ese nombre a
varios sistemas y técnicas. Sin embargo, todos esos métodos tienenen común el uso de una fase
estacionaria y una fase móvil.
En todas las separaciones cromatográficas, la muestra se desplaza con una fase móvil, que puede ser
un gas, un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una fase estacionaria
con la que es inmiscible, y que se fija a una columna o a una superficie sólida. Las dos fases se eligen de
tal forma, que loscomponentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase
estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven
lentamente con el flujo de la fase móvil; por el contrario, los componentes que se unen débilmente a la
fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentesde la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.

1.3. Conceptos básicos
Cromatograma:
Si colocamos un detector al final de la columna que responde a la concentración del soluto y se
registra su señal en función del tiempo (o del volumen de fase móvil añadido) se obtiene una serie de
picos que representan un grafico denominadocromatograma. Este grafico es útil tanto para el análisis
cualitativo como cuantitativo. La posición de los picos en el eje del tiempo puede servir para identificar
los componentes de la muestra; las áreas bajo los picos proporcionan una medida cuantitativa de la
cantidad de cada componente, (ver Figura 4-1).
Tiempo de retención tR:
Es el tiempo que transcurre después de la inyección de lamuestra hasta que el pico de concentración
del analito alcanza el detector; es el tiempo que tarda un compuesto en salir de la columna; es el tiempo
que tarda en aparecer el máximo de un pico, (Figura 1-1).

1

Se representa con el símbolo tR.
La velocidad lineal promedio de migración del soluto v es:

v=

L
tR

(1.1)

donde L es la longitud de la columna que esta rellena.

Figura1-1. Cromatograma característico de una mezcla de dos componentes. El pico pequeño de la izquierda
representa una especie que no se retiene en la columna, y de esta forma alcanza el detector casi inmediatamente
después del inicio de la elución. Por tanto, su tiempo de retención tM es aproximadamente igual al tiempo que
emplea una molécula de la fase móvil para pasar a través de la columna.Tiempo muerto tM:
Es el tiempo necesario para que la especie no retenida alcance el detector; es el tiempo de migración
de la especie no retenida; es el tiempo necesario para que, por termino medio, una molécula de la fase
móvil pase a través de la columna, (Figura 1-1).
De manera semejante la velocidad lineal promedio u del movimiento de las moléculas de la fase móvil es
u=

L
tM

(1.2)...