cromatografia

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL; ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS
BIOLOGICAS
QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOOGO.
Aguilar Zamora Emmanuel 5QM1
SEPARACION E IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS DE JUSGOA DE FRUTA POR
CROMATOGRAFIA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA
La cromatografía fue inventada por el botánico ruso Mikhail Tswett a principios del siglo XX, empleando esta técnica
para separar algunos pigmentosde las plantas, el nombre de este método viene del griego choma (color) y graphein
(escritura); el cual es un método de separación, identificación y determinación de los componentes químicos de
mezclas complejas ocupando dos fases inmiscibles entre ellas. En la cromatografía en capa fina, se utiliza una placa
(generalmente de aluminio) que se recubre con fase estacionaria que puede seralúmina o silica gel, en la cual se
presentara un fenómeno de adsorción selectiva. La fase móvil ascenderá por capilaridad por la placa arrastrando a su
paso los componentes de la mezcla (o también llamados solutos) logrando separarlos; las fases involucradas en este
tipo de cromatografía son: solido-liquido, las separaciones están basadas en las diferencias en la velocidad de
migración entre loscomponentes de la fase móvil, polaridad (generalmente la fase estacionaria será más polar que la
fase móvil, de forma que los componentes menos polares se desplazaran con una mayor velocidad) , tamaño de la
partícula, temperatura, pureza de los disolventes, entre otros. La cromatografía bidimensional, se basa en desarrollar
un cromatograma con dos fases móviles distintas en diferentesdirecciones.
El Rf, se entiende como:

El valor de este dependerá de las condiciones en las cuales se corre la muestra como la fase móvil o estacionaria
usada, las condiciones de la placa, entre otros.
Los aminoácidos son derivados aminados de ácidos carboxílicos, en los 20 aminoácidos comunes, los grupos amino y
carboxilo están unidos al mismo átomo de carbono (Carbono ), además que en este seunen sustituyentes diferentes.
Los aminoácidos los podemos clasificar de diferentes maneras; una de las más comunes es separarlos en base al
sustituyente que tenga en la cadena lateral.
FUNDAMENTO
En la cromatografía , en general se fundamentan en las velocidades de migración de las distintas sustancias que se
quieren separar , que están gobernadas por su solubilidades relativas en la faseestacionaria polar y la fase móvil no
polar . En un solo paso de separación cada soluto se distribuye entre ambas fases de acuerdo con su coeficiente de
partición ( es una constante de equilibrio definido) .Para n sistema de solventes y un tipo de papel determinado , cada
sustancia tiene un valor de Rf característico.
Una mezcla compleja que no se separa por completo en un solo cromatogramaen papel usa la cromatografía
bidimensional en papel. Basada en el principio anterior , con la diferencia en la técnica , la muestra se aplica en una
esquina y el cromatograma se corre en forma paralela a uno de los bordes del papel, al terminar el primer
cromatograma la hoja se rota 90º y se realiza una cromatografía paralela al segundo borde utilizando otro sistema de
solventes.
Dado quecada compuesto migra a una velocidad característica en un sistema de solventes determinado, la segunda
cromatografía debería incrementar en grado sustancial la separación de la mezcla de componentes

OBJETIVOS:
 Separar los aminoácidos presentes en el jugo de frutos para la cromatografía bidimensional.
 Identificara los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con lasolución
de aminoácidos.
 Comparar el grado de resolución de la cromatografía bidimensional , con el de la
unidimensional.

RESULTADOS:

Fig 1. Cromatograma I unidimensional. Fase móvil: cloroformo-metanol-amoniaco. Se observa de izquierda a
derecha los aminoácidos tipo (Tyr, Trp, Pro,Phe, Met, Lys, His, Glu, Gly, Arg, y Problema)

Fig 2. Cromatograma II unidimensional. Fase móvil:...