cualquier cosa

Dirección General de Pregrado
Vicerrectoría Académica

Guía de trabajos Prácticos
Bioquímica General
CÓDIGO: DBIO1038
2014

1

Índice de contenidos. Cuaderno del alumno.
Fecha de
realización

N°
Sesión

Tema

Tipo

1

Introducción a las prácticas de bioquímica

Laboratorio

2

Proteínas

Laboratorio

3

Actividad Enzimática

Laboratorio

4
5
6
7Metabolismo Intermediario de Glúcidos: determinación
de hidratos de carbono
Metabolismo Intermediario de Lípidos: determinación de
lípidos y triglicéridos
Metabolismo Nitrogenado: transaminasas
Replicación, Transcripción, Traducción y Regulación del
Mensaje Genético (KIT GFP)
Apéndice de conceptos útiles para el laboratorio de
bioquímica

2

Laboratorio
Laboratorio
LaboratorioLaboratorio

SESIÓN N° 2 LABORATORIO DE CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
INTRODUCCIÓN: Cuando una solución de proteínas se alcaliniza fuertemente con Hidróxido de sodio o
de potasio y se agrega una solución diluida de sulfato de cobre, se produce un color violeta, cuya
intensidad depende de la concentración de proteína utilizada.
Esta reacción, llamada reacción de Biuret, es propia de las sustancias quecontienen dos grupos
carbamilos (-CONH) unidos directamente o por medio de un átomo de carbono o de nitrógeno. Las
proteínas y los péptidos (a partir de los tripéptidos) presentan dicha estructura y por lo tanto, dan positiva
esta reacción.
El reactivo de Biuret (sulfato cúprico en medio alcalino), reacciona con compuestos que tienen dos o más
enlaces peptídicos dando coloracióncaracterística. El color desarrollado se debe a la formación de un
complejo de coordinación entre el Cu++ y cuatro átomos de nitrógeno que provienen de dos cadenas
peptídicas.
NO SE HARÁ INTRODUCCION DE LEY LAMBERT-BEER, DE CURVA DE CALIBRACION,
Materiales
Materiales: Espectrofotómetro ajustado a 546 nm.
Cubetas de plástico de 1,5 ml
Material volumétrico (micropipetas de 100 ul y de 1000 ul, tubos deensayo)
Muestras de suero normal y patológico,
estándar de proteínas totales.
Reactivo Biuret
Timer o cronómetro.
Agua destilada
METODOLOGÍA
Metodología: Se trabajará en grupos de 3-4 alumnos. Cada grupo deberá construir una curva de
calibración para la determinación de proteínas plasmáticas por el método de Biuret y hacer una
determinación en una muestra desconocida. Deberá analizar susresultados, discutirlos y preparar un
informe.
1) Construcción de la curva de calibración:
Preparar 6 tubos de ensayo, como se indica: El tubo 1 es el blanco, el tubo 2 es la muestra
correspondiente al suero normal, el tubo 3 es la muestra correspondiente al suero patológico, los tubos 4,
5, 6 y 7 contienen los volúmenes indicados de un estándar de proteínas (8 g/dL).

3

Mezclar poragitación, incubar 10 minutos a temperatura ambiente y leer la Absorbancia a 546 nm.
Resultados
Considerando que el estándar de proteínas tiene una concentración de 8.0 g/dl, calcule la concentración de
proteínas real en cada tubo

4

SESIÓN 3: LABORATORIO DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
INTRODUCCIÓN: La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y
vegetales. Lafunción de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se
forma una molécula tóxica que es el peróxido de hidrógeno, H 2O2 (agua oxigenada) que es necesario
eliminar. La catalasa es una proteína y podemos desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas. Al
desnaturalizarse, perderá también la función y como consecuencia su función catalítica, por lo que no
podrádescomponer el agua oxigenada.
Por otro lado, otra enzima, la amilasa o ptialina, presente en la saliva, actúa sobre el polisacárido almidón,
hidrolizando el enlace O-glicosídico, por lo que el almidón se terminará por transformar en unidades de
glucosa. La presencia de almidón puede ser puesta de manifiesto mediante lugol (solución yodo-yodurada),
mientras que la glucosa (azúcar...