Cuantificación de proteínas por el método Lowry

INFORME DE LA PRÁCTICA Nº 20: CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE LOWRY

OBJETIVO:
El objetivo de esta práctica es determinar la concentración de proteínas de una muestra, a través delmétodo de Lowry, utilizando el Folín-Ciocalteau que es reducido por los complejos de coordinación que forman las proteínas con el cobre a través de enlaces peptídicos, que da una coloración azul, quepuede ser cuantificada espectofotométricamente siendo proporcional a la concentración de proteínas.

MATERIAL EMPLEADO:
-Agua destilada
-Seroalbúmina (SAB)*
-Micropipetas (dos en las cualesemplearemos puntas amarillas y una con punta azul)
-Tubos de hidrólisis
-Espectómetro
-Gradilla con los tubos de hidrólisis
-Pipeta Pasteur
*SAB: es una proteína que mezclada con una cantidad conocidade Folín A-C, será empleada para obtener los valores que se usarán a la hora de realizar una recta patrón.

REACTIVOS EMPLEADOS:
Folín A-C: Utilizado para elaborar los cinco tubos de hidrólisis, loscuales darán lugar a la recta patrón y facilitarán la función del Folín-Ciocalteau. El Folín está compuesto por:
CuSO4 que proporciona el Cu para formar el complejo con las proteínas.
NaOH y Na2CO3 que proporcionan el medio alcalino adecuado para la reducción del Folin-Ciocalteau.
Tartrato sódico – potásico que impide la precipitación del Cu metálico en disolución.
Folín-Ciocalteau: Elcual contiene Fosfomolibdeno y fosfowolframio que serán reducidos por el complejo cobre – proteína formado en medio alcalino, con la aparición del color azul intenso característica de esta reacción. Esteasí mismo, contribuirá a la formación de complejos de coordinación.

*IMPORTANTE: Previo a empezar con los cálculos y el procedimiento experimental, es necesario limpiar y rotular nuevamente todoslos tubos.

PROCESO EXPERIMENTAL:
-El primer paso que hay que realizar es el de preparar los tubos con las muestras.
-Ahora, por un lado preparamos los tubos correspondientes al patrón de SAB:...