Cuantificación de proteínas

Métodos de Cuantificación de Proteínas
En el proceso de purificación de proteínas es fundamental hacer una cuantificación de las proteínas, existen diferentes formas de hacer esta cuantificación yse basan en diversas propiedades de las proteínas como su capacidad para absorber luz UV, la formación de derivados químicos y la unión de algunos colorantes. A continuación se muestra una tabla dealgunos de los métodos más comunes con su descripción, ventajas y desventajas:
Clasificación Nombre Descripción Ventajas Desventajas
Métodos de Absorción Método UV Se expone a las muestras a intervalosde longitud de onda entre 230 y 300nm donde se obtienen las bandas más significativas (principalmente a 280nm) gracias a los residuos de triptófano y tirosina.
Para obtener la concentración por estemétodo se usa la ecuación de Lambert y Beer y el coeficiente de extinción molar de la BSA. No se destruyen las muestras.
Es un método rápido.
Relativamente sensible. Existe mucha interferencia deotros compuestos que también absorben la luz UV.
Los ácidos nucleicos también absorben a 280nm.
La solución y el sistema deben ser relativamente puros.
Métodos Derivados Colorimétricos Biuret Estábasado en la generación de un complejo coloreado (violeta) de Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptídicos. La intensidad de color es proporcional a la concentración de las proteínas. Es un métodorápido.
Es el método más simple para analizar proteínas.
Tiene una reacción muy específica, es decir, tiene poca interferencia.
Tiene poca sensibilidad y sólo se recomienda para cuantificarproteínas en preparados muy concentrados.
Se debe estandarizar el color con proteínas conocidas.
Lowry Es un proceso en el que se genera un complejo cobre-proteína en una solución alcalina. Mediante lareducción del reactivo se produce una coloración azul intensa. Para este método es necesario primero proceder con el método de Biuret y después realizar una reacción de Folin- Ciocalteau. Muy...