cuantificador de proteínas

Cuantificación de Proteínas por Espectrofotometría

1. INTRODUCCIÓN:
Las proteínas son macromoléculas que están compuestas por aminoácidos, constituidos básicamente por carbono (C, en la tabla periódica de los elementos), hidrogeno (H), oxigeno (O) y nitrógeno (N). Estas son esenciales para el organismo, pueden ser utilizadas con fines estructurales como la queratina, reguladoras como lainsulina o la hormona del crecimiento, transportadoras como la hemoglobina, entre otros usos biológicos.
El método para cuantificarlas por Reactivo de Biuret (Sulfato de Cobre en medio Alcalino) reconoce enlaces peptidicos (Carboxilo terminal-Amino terminal de cada aminoácido), es el más simple al momento de cuantificar proteínas pero se necesita una concentración alta de éstas para producir uncambio de color en este reactivo, que cambia de color azul a rojo-violeta por un complejo entre los iones Cu+2 y los electrones no compartidos del Nitrógeno, y de este modo con una medición de absorbancia con un espectrofotómetro se conoce la concentración de proteínas en una determinada solución.

2. HIPÓTESIS:
El reactivo de Biuret cambiará de color al tomar contacto con las distintasdiluciones que se hará de la muestra problema a cuantificar, por otro lado la incubación que se realizará a las diluciones de la muestra problema, hará que estas presenten turbiedad y harán más precisa la lectura de absorbancia por parte del espectrofotómetro, dicha absorbancia será proporcional a la Concentración de la proteína de dicha muestra.
3. OBJETIVOS:
3.1. Objetivo general
-Conocer elproceso de Cuantificación de Proteínas
-Aplicar un método colorimétrico para determinar la concentración de proteínas de una muestra problema especifica.
3.2. Objetivos específicos
- Aprender el uso de un Espectrofotómetro y su aplicación para métodos colorimétricos
- Utilizar el Reactivo de Biuret para cuantificar proteínas
-Realizar una curva de calibración para determinar la concentración deproteínas de una muestra problema (Suero)
4. MATERIALES Y MÉTODOS
-2 Pipetas de Aforo 1mL1/10 Reactivos:
-1 Pipeta de 5mL - Solución Estándar de Albumina 1%
-Piseta - Muestra de Suero (Muestra Problema)
-Gradilla - Reactivo de Biuret
-7 Tubos de ensayo
-Propipeta
-Espectrofotómetro-Papel Absorbente
-Cubeta

Se comenzó realizando las diluciones correspondientes a cada tubo, primero se realizo el blanco que usaríamos para calibrar a 0 el espectrofotómetro, luego con la pipeta 1ml 1/10 se aforo cada uno de los tubos con su correspondiente mL de solución estándar de albumina 1% y estos tubos enumerados del 1 al 5 de menor a mayor mL. Luego se aforo con la otra pipeta de 1mL1/10, 1mL de suero a un tubo de ensayo marcado con la letra M. A cada uno de estos tubos se le agrego 4mL del Reactivo de Biuret, y se aplico agitación para que se mezclara de manera correcta el reactivo con la solución que cada tubo tenía en su interior. Al finalizar la preparación de muestras, en la gradilla se colocaron los tubos de ensayo y se colocaron en una incubadora a 37ºC por cerca de 10minutos, con el fin de que se tornara más turbulenta (oscura) cada una de las soluciones para permitir una precisa cuantificación. Luego de eso se lleva cada muestra al espectrofotómetro y se agrega una pequeña alícuota, suficiente para llenar la cubeta y que permita que el espectrofotómetro arroje los resultados esperados, comenzando primero con el blanco para calibrar el aparato a 0 absorbancia yluego se continua leyendo con cada uno de los tubos, limpiando previamente la cubeta para que no se mezclen las soluciones y den resultados indeseados.
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados fueron los siguientes:
Reactivos
Blanco (mL)
1(mL)
2(mL)
3(mL)
4(mL)
5(mL)
Muestra (mL)
Estándar de Albumina 1g%
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
0
Agua Dest.
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0
Muestra...