Cultivo in vitro de tejidos vegetales

CULTIVO IN VITRO DE TEJIDOS VEGETALES
María Elena Daorden E.E.A. INTA SanPedro

CULTIVO IN VITRO DE TEJIDOS VEGETALES Conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento y/o crecimiento de células o tejidos en un medio nutritivo y en condiciones ambientales controladas.

Los tejidos vegetales pueden cultivarse in vitro

La célula retiene toda la información para regenerar una plantacompleta

Diferenciación celular
La célula adquiere propiedades diferentes a las de la célula que la originó Desdiferenciación
Célula diferenciada Célula diferenciada Célula desdiferenciada Retiene información

Totipotencialidad

CULTIVO IN VITRO DE TEJIDOS VEGETALES Conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento y/o crecimiento de células o tejidos en un medio nutritivo y en condicionesambientales controladas.

Medio nutritivo
Las porciones del vegetal que se cultivan in vitro: “explantos” No son autotróficos

Necesidades nutricionales y hormonales de los cultivos de órganos y tejidos vegetales Agua Macro Micro Sustancias orgánicas Nutrientes Fe Zn Azúcares N B Aminoácidos P Mn Vitaminas K Cu Auxinas Ca Ni Citocininas Mg Co Giberelinas S Al Mo I

Medio nutritivo:Fitohormonas Auxinas
0.01 a 10 mg/l
Acido indol Acético (AIA) Acido Indol Butirico (IBA) Acido Naftalén Acético (ANA) 2-4 D

Citocininas
0.03 a 10 mg/l
Bencil adenina-(BA) Bencilaminopurina (BAP) 2ip Zeatina Tridiazuron

Se disuelven en NaOH 1N

Giberelinas

Se disuelven en HCl 1N En cultivo de meristemas y para elongación: Acido Giberélico
(GA3)

Medio nutritivo

Auxinas CitocininasAuxinas

Citocininas

Parte aérea

Enraizamiento

Modalidades de cultivo in vitro Cultivo de meristemas Cultivo de yemas

Cultivo in vitro de plantas superiores

Cultivo de anteras

Cultivo de embriones

Cultivo de protoplastos

Tipos de cultivo in vitro

Esquema modificado a partir de Lindsey y Jones, 1989, en Plant Biotechnology in Agriculture. p 59)

Multiplicaciónen plantas • Semillas
Reproducción sexual Progenie con distinto genotipo

• Vegetativa:

bulbos, esquejes, estacas, tubérculos

Reproducción asexual Progenie con idéntico genotipo Descendencia uniforme Se transmiten enfermedades

Producción de plantas libres de enfermedades
Métodos Tratamientos con calor: Cultivo de meristemas Ambos Microinjerto: Injerto de meristemas sobre un pie sano.para algunos virus y micoplasmas

Cultivo de meristemas

Esquema modificado a partir de Lindsey y Jones, 1989, en Plant Biotechnology in Agriculture)

Obtención de plantas de sanidad controlada (Cultivo de meristemas)
Por qué el meristema?

“La concentración del patógeno no es uniforme en la planta infectada”
Meristema
• Sistema vascular poco diferenciado • Elevada actividadmetabólica • Elevada concentración de auxinas

Esquema para la obtención de plantas de sanidad controlada
Extracción del ápice (0.2-0.5 mm) Cultivo del ápice en un medio adecuado Planta regenerada Planta establecida en sustrato Planta saneada Cultivo libre de virus
Cuidadoso control de la humedad Rigurosas evaluaciones (plantas indicadoras, injertos, serología etc)

Mantenimiento, multiplicación,Monitoreo de reinfecciones virósicas

Cultivo de meristemas
Consideraciones generales
• El proceso no ofrece total seguridad • Importancia de las técnicas de diagnóstico • Análisis confiables • Sistemas de detección sensibles • Especificar de qué virus se ha liberado y la técnica de diagnóstico empleada

Producción de plantas libres de enfermedades
Métodos Tratamientos con calor: Cultivode meristemas Ambos Microinjerto: Injerto de meristemas sobre un pie sano.
para algunos virus y micoplasmas

Microinjertos
Injertar ápices caulinares en un portainjerto

Etapas: Germinación in vitro de las semillas del portainjerto Preparación de la plántula para ser injertada Extracción del ápice de la planta infectada Mantenimiento de la plántula injertada en cultivo Mantener la planta...