Cultivo

UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE MEDICINA
LABORATORIO DE AGENTES BIOLÒGICOS
PRACTICA NO. 3
1. DATOS INFORMATIVOS
NOMBRE: Juan Salinas No. DE GRUPO: 4
CURSO: Cuarto “A” FECHA: 29 de junio del 2012
DOCENTE: Dra. Maricela Toasa N.
2. PRÀCTICA
A) MÈTODOSDE INOCULACIÒN E IDENTIFICACIÒN DE BACTERIAS GRAM NEGATIVAS (Enterobacterias)

AISLAMIENTO: Para aislar bacterias tenemos que comenzar con agares inespecíficos como el agar sangre, luego al chocolate en donde veremos bacterias sideròforas y siguiendo la línea de secuencia, aislar colonias en agar McConkey donde se puede hacer un contaje de colonias y de ahí siguen las pruebas bioquímicas .Para ésta práctica se requirió de 2 tipos de agares, un agar de enriquecimiento como es el agar sangre, para el cultivo de bacterias gran positivas, que posteriormente fueron usadas para un antibiograma. También se usó un agar selectivo y de diferenciación, como es el agar McConkey el cual contiene lactosa y es específico para el desarrollo de bacterias fermentadoras de lactosa, aquí se aislóbacterias Gram negativas.

Las bacterias de esta práctica son Gram negativas ( enterobacteriaceae) porque fermentaron lactosa es decir existe cambios de coloración a rosado- purpura con elevación del pH, en los medios de cultivo con lactosa como el agar MacConkey.

Las enterobacteriaceae son bacterias que presentan características bioquímicas particulares como catalasa positivas y oxidasanegativas, son anaerobias facultativas, no esporulan y pueden ser móviles e inmóviles.

IDENTIFICACIÒN: Para la inoculación en los tubos con las pruebas bioquímicas correspondientes tomamos la muestra del agar McConkey con un hisopo y procedemos a inocular en los tubos.

PRUEBA BIOQUÌMICA | INOCULACIÒN | IDENTIFICAR | INTERPRETACIÒN |
Citrato (medio sólido) | Clava el asa bacteriana en elfondo del tubo y se arrastra haciendo estrías en los bordes del tubo que contiene citrato. | Fuente de carbono ( citrato) | Verde = negAzul = postV/A = vbl |
TSI (medio sólido) | Clava el asa bacteriana en el fondo del tubo y se arrastra haciendo estrías en los bordes del tubo que contiene TSI. | 3 azucares: glucosa, lactosa, sacarosa. Determina: capacidad de fermentar hidratos de carbono,gas sulfhídrico y gas. | Fermenta glucosa: amarillo parte inf.Fermenta lactosa y sacarosa: amarillo parte sup.Neg = rojo naranjaPresencia de gas en forma de burbujas Producción SH2 = mancha negra |
CIM ( medio sólido) | Clava el asa bacteriana en el fondo del tubo y se retira sin hacer estrías. | C: descarboxilasaI (indol): enzima triptófano M: motilidad, si bacteria presenta flagelo. | C :amarillo = negMorado = postIndol : presencia de un anillo rosado al añadir react de KovacsMotilidad: crecimiento difuso desde la línea de siembra |
MRVP (medio líquido) | Se introduce el asa bacteriana hasta el fondo y se sacude un poco en el medio | RM: rojo de metilo: actúa sobre glucosaVP: vos power | Amarillo: negRojo-anaranjado = post. |
MALONATO (medio líquido) | Se introduce y se agitael hispo. | Utilidad del malonato de sodio como fuente de carbono | Verde= negAzul = post. |

A hora para el antibiograma tomamos la muestra del agar sangre/chocolate con un hisopo y clavamos en el medio de cultivo BHI y tapamos con algodón, y hacemos lo mismo con la muestra del agar McConkey y dejamos por una noche.
Para la inoculación en el medio Muller Hilton tomamos las muestras delmedio BHI y colocamos en solución salina por 10 min y sacamos y procedemos a inocular con el mismo hisopo haciendo una línea en la mitad y diseminando por todas las direcciones en forma de estría y hacemos un borde con el hisopo alrededor del perfil del medio.

Identificación de la muestra
Agar sangre/chocolate: 26106 = bacterias Gram positivas
Agar McConkey: 602 = bacterias Gram negativas...