Desarrollo de electrodos compósitos enzimáticos para la detección y determinación de compuestos fenólicos

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA ANALÍTICA
DESARROLLO DE ELECTRODOS COMPÓSITOS
ENZIMÁTICOS PARA LA DETECCIÓN Y
DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS
Directores: José Manuel Pingarrón Carrazón
Ángel Julio Reviejo García
BEATRIZ SERRA FERNÁNDEZ
MADRID, 2002 Deseo expresar mi más sincero agradecimiento a todos aquellos que,de
una forma u otra, han hecho posible la realización de esta Tesis.
En primer lugar, a quienes la han dirigido, el Dr. José Manuel Pingarrón
Carrazón y el Dr. Ángel Julio Reviejo García, por su dedicación y apoyo
constantes, y por su preocupación tanto en lo científico como en lo humano.
A todos los compañeros y miembros del Grupo de Electroanálisis, quienes han
contribuido a haceragradable la labor diaria, y tantas veces me han prestado
su ayuda. A Silvia y Beatriz por su colaboración.
En especial, deseo agradecer a Nuria todo el tiempo compartido en el
laboratorio, que tanto me ha enseñado y aportado.
A Miriam, Raúl, Rocío, Ruth, Íñigo, Ana, y Mariluz, por su apoyo, compañía y
amistad.
Finalmente a mi familia y a Mario. Esta Tesis no se habría terminado sinellos. A la memoria de Alfredo, mi padre ÍNDICE
I. OBJETIVO Y PLAN DE TRABAJO
II. INTRODUCCIÓN
II.1. Generalidades sobre compuestos fenólicos
II.1.1. Propiedades físicas y químicas
II.1.2. Procedencia, utilidad y distribución en el medio ambiente de los compuestos fenólicos
II.1.3. Mecanismos de actuación y efectos tóxicos
II.1.4. Legislación sobre compuestos fenólicos
II.1.5.Revisión bibliográfica de métodos para la determinación de compuestos fenólicos
II.2. Biosensores
II.2.1. Enzimas selectivas de compuestos fenólicos
II.2.1.1. Tirosinasa
II.2.1.2. Peroxidasa
II.2.1.3. Lacasa
II.2.2. Enzimas en medios orgánicos y en micelas inversas
II.2.3. Electrodos compósitos
II.2.4. Biosensores amperométricos para la determinación decompuestos fenólicos: revisión bibliográfica
III. PARTE EXPERIMENTAL
III.1. Instrumentación
III.1.1. Aparatos
III.1.2. Electrodos y células de trabajo
III.2. Reactivos
III.3. Procedimiento experimental
III.3.1. Preparación de disoluciones
III.3.2. Preparación de los electrodos compósitos
III.3.2.1. Preparación de los electrodos compósitos de grafito-Teflón
III.3.2.2.Preparación de los electrodos compósitos de grafito-EPD
III.3.2.3. Preparación de los electrodos compósitos de RVC-resina epoxi
III.3.2.3.1. Pretratamiento del RVC
III.3.2.3.2. Preparación de los electrodos de RVC-resina epoxi
III.3.2.4. Preparación de los electrodos compósitos de grafito-Teflón-tirosinasa
III.3.2.5. Preparación de los electrodos compósitos de grafito-EPD-tirosinasaIII.3.2.6. Preparación de los electrodos compósitos de RVC-resina epoxi-tirosinasa
III.3.2.7. Preparación de los electrodos de grafito-Teflón-peroxidasa
III.3.2.8. Preparación de los electrodos de grafito-Teflón-glucosa oxidasa-peroxidasa
III.3.2.9. Preparación de los electrodos de grafito-Teflón-tirosinasa-peroxidasa
III.3.2.10. Preparación de los electrodos degrafito-Teflón-tirosinsasa-glucosa oxidasa-peroxidasa
III.3.3. Regeneración de la superficie de los electrodos
III.3.4. Activación de los electrodos de grafito-Teflón-Tyr en micelas inversas
III.3.5. Obtención de los amperogramas en discontinuo
III.3.6. Obtención de los fiagramas
III.3.7. Medida de la resistividad de las pastillas compósitas de grafito-Teflón y grafito-EPD
III.3.8. Cálculo del áreaactiva de los electrodos compósitos de tirosinasa
III.3.9. Obtención de los voltamperogramas cíclicos
III.3.10. Obtención de microfotografías de barrido electrónico de las superficies de los electrodos compósitos
III.3.11. Cálculo de los coeficientes de capacitancia de los electrodos de grafito-Teflón (70%), grafito-EPD
(5%), RVC-resina epoxi y carbono vitrificado
III.3.12. Estudio...