Deshidrogenacion del acido succinico

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Universidad Veracruzana
Facultad de Ciencias Químicas
Laboratorio de Bioquímica Metabólica

Practica # 1
Deshidrogenación del ácido succínico
Objetivo:
Que el alumno aprecie laactividad de la enzima de succinato deshidrogenasa mediante una reacción colorimétrica.
Fundamento:
La enzima succinato deshidrogenasa o deshidrogenasa del ácido succínico es una Oxidorreductasa quecataliza la oxidación del succinato para formar fumarato siendo la coenzima el FAD. Esta enzima se localiza en eucariotes en la membrana mitocondrial interna.
El H2 cedido por el succinato puede sertransferido del FADH2 a un colorante susceptible como el azul de metileno que al cambiar su estado redox pasa de coloreado a incoloro o viceversa.



Material:
10 tubos de ensayo
Tinagalvanizada
2 pipetas graduadas de 5 ml
2 pipetas graduadas de 1 ml
2 matraces volumétricos de 50 ml
Gradilla metálica
Equipo:
1 parrilla eléctrica
Reactivos:
Suspensión de levadura al 10%
Solución deácido succínico 0.5 M
Solución de ácido malónico 1 M
Aceite de inmersión (ó aceite mineral)
Solución de metileno al 0.1%
Agua destilada c. b. p.
Procedimiento:
1. Etiquetar cuatro tubos deensaye como A,B,C,D.

Prepáralos de la siguiente forma


TUBO
A
B
C
D
H2O DESTILADA (ML)
3
-
-
-
SUSPENSIÓN DE LEVADURA (ML)
-
3
3
3
GLUCOSA 0.5 M (ML)
-
1
1
1
ACIDO SUCCÍNICO 0.5(ML)
-
1
-
0.5
ACIDO MALONICO 1 m (ML)
-
-
1
0.5

2. Agregar dos gotas de azul de metileno 0.1% a cada tubo. Sostener con los dedos cada tubo y mezclar. Continúe agregando la tintura deazul de metileno gota a gota hasta que la solución se torne azul ligero.
3. Sostenga cada tubo haciendo un ligero ángulo. Vierta aproximadamente 1 ml de aceite de inmersión, haciéndolo bajar desde elborde, formando una película sobre la solución.
4. Colocar los tubos a baño maría a 37°C.
5. Examinar los tubos transcurridos 40 min; observe el cambio de color, si lo hay o no y anote los...