Desnaturalización de albúmina


Objetivo: Observar la solubilidad y desnaturalización de las proteínas con varios agentes físicos y químicos
Introducción
La solubilidad de la mayoría de las proteínas disminuye frente a elevadas concentraciones de sales. Este efecto, llamado desalado (“salting out”), resulta muy útil aunque no este completamente comprendido. La dependencia de la solubilidad respecto a la concentraciónsalina difiere en las proteínas. Por ejemplo, a una concentración de sulfato 0.8M, el fibrinógeno precipita, mientras que requiere una concentración 2.4M para precipitar la albúmina sérica. El precipitado por salado también resulta útil para concentrar disoluciones diluidas de proteínas.
Por otro lado, la desnaturalización es la pérdida de la estructura de una proteína, con o sin pérdida de laactividad biológica, dependiendo de a qué nivel de estructura fue la desnaturalización. Para desnaturalizar una proteína existen varios métodos, tanto físicos como químicos. En los primeros encontramos calor y bajas temperaturas. En los segundos podemos mencionar a los ácidos fuertes, urea; detergentes como el SDS (dodecil sulfato de sodio), β-mercaptoetanol, ditiothreitol, etc.
Materiales y Métodos
9tubos de ensaye
1 mechero
1 pinzas para tubo de ensaye
1 vaso de precipitados
1 rejilla de asbesto
1 vórtex

Reactivos y soluciones
H2SO4 1.0 M
HNO3 1.0 M
NaOH 1.0 M
Cloruro de Mercurio 10%
Nitrato de Plata 10%
Ácido Pícrico 10%
Ácido tricoloroacético 10%
Alcohol 96° a 4° C
HCl concentrado
Leche
Limón



Antecedentes

Las primeras referencias a proteínas las tenemos en elúltimo medio siglo antes de Cristo, cuando Plinio "El viejo", lo acuño para nombrar a la clara de huevo (album ovi, lo blanco del huevo en latín).

En 1827, William Prout clasificó las sustancias que conformaban los alimentos en tres categorías: las sacarinosas (los actuales azúcares), las oleaginosas (los actuales lípidos), y las albuminosas (las que hoy llamamos proteínas).
Jöns JakobBerzelius (1779-1848), mencionaba alguna vez: "Supongo que el óxido que constituye la base de la fibrina y de la albúmina (y al que hay que dar nombre, por ejemplo proteína) está compuesto de un radical terciario combinado con oxígeno (...). Parece ser la molécula primitiva o principal de la nutrición animal (...). Jakob fue el primero en introducir la palabra proteína, cuyo origen se encuentra en laraíz griega protos =primero y el sufijo ina, utilizado en los nombres de otros compuestos químicos. La cualidad de "primero" se da como dijo Gerardus Johannes Mulder (1802-1880) por referirse a un compuesto que estaba en el origen de sustancias muy distintas.

Han sido numerosísimos los descubrimientos y los científicos dedicados a la revelación de la naturaleza proteica. Una fecha muy importanteen la historia de estas macromoléculas es 1925 cuando se comienza a sospechar que la desnaturalización de las proteínas puede ser reversible, y a distinguir entre los conceptos de coagulación y desnaturalización. Hasta la fecha las incógnitas no han desaparecido completamente y se mantienen constantes las investigaciones sobre éstas enigmáticas y vitales moléculas. Cuando la proteína no hasufrido ningún cambio en sí en la interacción con el disolvente, se dice que presenta una estructura nativa.

Se llama desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria, quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija.

Cualquier factor que modifique la interacciónde la proteína con el disolvente disminuirá su estabilidad en disolución y provocará la precipitación. Así, la desaparición total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralización de las cargas eléctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrógeno facilitará la agregación intermolecular y provocará la precipitación. La precipitación suele ser consecuencia del fenómeno llamado...