Determinación de cafeína mediante cromatografía líquida

DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA MEDIANTE CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA PRESIÓN.
FUNDAMENTO TEÓRICO
La cromatografía líquida de alta presión o también llamada de alta resolución (HPLC), es una técnica muyutilizada para la separación y análisis cuantitativo de una amplia gama de mezclas, especialmente aquellas donde:
a) Los componentes no son suficientemente volátiles.
b) Los componentes sontérmicamente estables para ser resueltos por cromatografía de gases.

Esta indicada especialmente para:
_Análisis de productos farmacéuticos
_Control de drogas y sus metabólicos en fluidosbiológicos.

El procedimiento consiste en llevar los componentes de una mezcla a través de una columna rellena con una fase estacionaria adecuada, mediante bombeo de una fase móvil a presión elevada.
Elorden de salida de elución es decir el orden de salida de los componentes de la columna depende de la naturaleza química de los mismos y de las fases móvil y estacionaria.
Fase estacionaria→ Lasfases estacionarias usadas hoy en día son de sílice químicamente modificada de un tamaño de partícula muy pequeño, lo cual proporciona una compacidad tal en la columna que para hacer fluir la fasemóvil así como los analitos a través de ella es necesario trabajar a presiones muy elevadas.
Una vez que los componentes de la mezcla han atravesado la columna son detectados, en este caso, medianteespectrometría ultravioleta. Si se registra la señal del detector, el área o altura de los picos obtenidos son proporcionales a la concentración del analito.
MODO DE OPERAR.
_En un vaso de precipitadosde 200ml calentamos 100ml de agua destilada, mientras tanto pesamos 1g de café, y una vez el agua llega a ebullición la retiramos y le añadimos el café, tapando el vaso con un vidrio de reloj,agitando de vez en cuando.
_Una vez la temperatura del vaso a disminuido filtramos la disolución y tomamos 1ml del filtrado que llevaremos a un matraz aforado de 25 ml y enrasaremos con una mezcla de...