DETERMINACIÓN DEL PESO MOLECULAR

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SINALOA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICA-BIOLÓGICAS
BIOQUÍMICA ESTRUCTURAL
DRA. LILIANA LEÓN LÓPEZ
INTEGRANTES:
ARROYO PARDO IRENE JOSEFINA
DÍAZ THOMAS MARÍA FERNANDA
ONTIVEROS ARMENTA KAREN PAULETH
OSUNA HERNÁNDEZ ELMER ADÁN
ZAVALA LÓPEZ DANIELA
CULIACÁN, SINALOA A 6 DE OCTUBRE DE 2015

DETERMINACIÓN DEL PESO
MOLECULAR

Se dispone de varios procedimientos que
permitendeterminar los pesos moleculares de
los biopolímeros, se describirán algunos de
ellos. Estos procedimientos también se usan
para la evaluación de la pureza de muestras, y
las técnicas cromatográficas y electroforéticas,
también pueden emplearse para el aislamiento
y la separación de biopolímeros.

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA POR
IMPREGNACIÓN EN GEL
También llamada
cromatografía por criba
molecular.
Paraesta técnica se utiliza una fase
estacionaria solida que consta de
diminutas partículas esféricas en gel
que funcionan como cribas
moleculares. Estas partículas están
hechas de sustancias cuya
estructura química esta entrelazada
de modo algo parecido a una malla.
Hay dos tipos diferentes que se
entrelazan, la agarosa y el dextrano
(dos carbohidratos) por un lado, y la
poliacrilamida por el otro.poliacrilamida

¿CÓMO SE UNEN?
Al ponerlas en un medio acuoso, las
diminutas partículas del gel absorben el
agua y se hinchan para formar gránulos
de mayor diámetro con trama porosa; la
amplitud de los poros depende del
grado de entrecruzamiento de la
estructura.
1)

Se utilizan esos gránulos para
empacar una columna vertical

2)

Se coloca un pequeño volumen de
la muestra que se va a analizaren
la parte superior del lecho de la
columna de gel

3)

Se hace correr
ininterrumpidamente una solución
amortiguadora

PROCESO:
Al ingresar en la columna de gel, las sustancias de la muestra
empiezan a interactuar de modo reversible con los gránulos al entrar y
salir de ellos por los poros.
El ingreso de los gránulos estacionarios retrasa el movimiento de las
sustancias a través de la columna, demodo que las moléculas
pequeñas tardan mas que las grandes en salir porque ingresan y se
impregnan con mayor facilidad en el interior de los gránulos.
Las moléculas cuyas dimensiones son superiores a las de los poros no
penetran en ellos, y por tanto, como están disueltas en la fase móvil,
pasan con facilidad a través de la columna.
solutos
gel
---------->

---------->

---------->

Flujo deeluyente
Se recolectan las
fracciones de
efluente para
analizarlas y
determinar la
presencia de
solutos

Las sustancias presentes en el efluente de la columna se detectan midiendo la absorción
de luz UV:


280 nm para proteínas



260 nm para ácidos nucleicos
O, si la muestra contiene algo de

C o 3H (isotopos radiactivos), cuantificando la
radiactividad.
14

Ve de 75
mLPara y

ve

y

y
mezcl
aw
x

z

Efluente recolectado (mL)
---->
Perfil cromatografico de una mezcla de
sustancias (w,x,y,z) con el cual se
ejemplifica la capacidad del método para
separar los componentes individuales

Absorbancia de luz UV
--->

Absorbancia de luz UV
--->

Los picos del perfil cromatográfico representan zonas individuales de proteínas (o
cualquier otra sustancia) que se separaron en virtud de que haydiferencia en sus
dimensiones moleculares.

Sustan
cia
pura

Efluente recolectado (mL)
---->de una sustancia pura, donde solo
Perfil
aparece un pico

Cada componente del patrón esta identificado por su volumen de levigación
(ve) es decir, el volumen de efluente recolectado que corresponde al apíce
del pico. Un patrón con un solo pico indica la pureza de la muestra original
aplicada a la columna.

Log10 (peso
molecular)

5.2
4.9
4.3
-

. .
.

Y globulina (humana) peso molecular = 158000
Transferina (humana; 88000
Seroalbumina (bovina) 67000

.

Ovoalbúmina; 45000

.

Quimotripsinogeno;
25000
Mioglobina (esquina); 16900

.

.

Citocromo c ( de corazón de
caballo); 13400

55
65
75
85
Volumen
de levigación (ve en mL) --------->
95
105

Correlación
4.0 entre el peso molecular y el volumen de...