Determinación Espectrofométrica De Hemoglobina En Una Muestra De Sangre

Determinación Espectrofométrica de hemoglobina en una muestra de sangre

INTRODUCCION
La hemoglobina es una proteína conjugada contenida en el interior de los eritrocitos a razón de 300000000moléculas de hemoglobina por cada eritrocito en los humanos. Sirve como vehículo para el transporte de oxigeno de los pulmones, donde la tensión de O2 es elevada, hacia los tejidos, donde es baja. Unamolécula de hemoglobina es un tetrámero que consta de dos pares de cadena de polipéptidos, dos subonidades alfa y dod beta que está enfrentadas entre sí en torno a una cavidad en el centro de la molécula.Cada subunidad contiene un grupo hemo (región ligante de oxigeno, que contiene un átomo de hierro ferroso), por lo cual una molécula de hemoglobina puede unir 4 moléculas de oxigeno.
La hemoglobinareducida es hemoglobina con hierro no asociado al oxigeno. Cuando cada grupo hem se asocia con una molécula de oxigeno, la hemoglobina toma la forma de oxihemoglobina. Tanto en la hemoglobina reducidacomo en la oxihemoglobina, el hierro permanece en estado ferroso (Fe ++). Con el hierro oxidado al estado ferrico se forma Meta hemoglobina y la molécula pierde su capacidad para transportar oxigenoy dióxido de carbono.

FUNDAMENTO
El método que se utilizara para realizar esta determinación se denomina Método de la Cianometahemoglobina y se fundamenta en que al combinar un volumendeterminado de sangre con una solución que contiene k3fe (CN)6 y KCN (solución de Drabkin), el ferrocianuro convierte el hierro ferroso de las hemoglobinas en ferrico, para formar metahemoglobina y la moléculapierde su capacidad para transportar O2. Luego la meta hemoglobina se combina con el cianuro de potasio para formar cianometahemoglobina de color rojo anaranjado brillante, apto para ladeterminación colorimétrica a 540 nm.

REACTIVOS
A) Solución de Drabkin:
Bicarbonato de sodio---- 1g
Cianuro de potasio-------0,05g
Ferrocianuro de potasio---0,2g
H20 deshilada-------------1000 ml...