determinacion de Hto,Hb

DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA Y HEMATÓCRITO - Informe de Laboratorio #9 Bioquímica II
lunes, 20 de agosto de 2012
Informe de Laboratorio #9
DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA Y HEMATÓCRITO

MARCO TEÓRICO
Hemoglobina
La hemoglobina es una proteína que contiene hierro y que le otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxígeno porla sangre desde los pulmones a los tejidos.

La hemoglobina también transporta el dióxido de carbono, que es el producto de desecho del proceso de producción de energía, lo lleva a los pulmones desde donde es exhalado al aire.
El análisis de la hemoglobina se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetría, con el recuento de glóbulos rojos o hematíes.

Hematocrito
Tras unacentrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el depósito de los glóbulos rojos, principalmente, y otro nivel del plasma total. La relación porcentual entre ambos es lo que describe el hematocrito y describe el porcentaje de células transportadoras de oxígeno con respecto al volumen total de sangre.

El análisis del hematocrito se realiza normalmente en un estudio completode hematimetría, con el recuento de glóbulos rojos o hematíes. 

MATERIALES
Determinación de hemoglobina
• Pipeta automática, de ul
• Muestra (sangre)
• Espectrofotómetro
• Tubos de ensayo 
• Cubetas de 1cc o 3cc
• Reactivo CMHb (cianometahemoglobina)
• Lanceta
• Algodón y alcochol

Determinación del valor de hematocrito 
• Muestra de sangre
• Tubos capilares de vidrio
•Centrífuga de Hematocrito
• Lector de microhematocrito
• Plastilina
• Lanceta
• Algodón y alcohol

PROCEDIMIENTO
Determinación de Hemoglobina
1. Se preparó el reactivo CMHb con la mezcla de dos reactivos de los frascos con tapa azul 25 ml y tapa blanca 25 ml, y con agua destilada 450 ml (500 ml).
2. Extraer una muestra de sangre total realizando una punción con la lanceta en el dedo gordo en laperiferia.
3. Con una micropipeta automática tomar 20 ul de sangre extraída.
4. En dos cubetas marcadas B (Blanco) y M (Muestra), colocar:


B
M
R. CMHb
5 ml
5 ml
Sangre
-
20ul
Incubar por 3 - 5 min. al ambiente
Leer a 540 nm

5. Leer la absorbancia de cada tubo y calcular los resultados con una cantidad estándar de 36.8.

Determinación del valor de hematocrito
1. Extraer unamuestra de sangre total realizando una punción con la lanceta en el dedo gordo en la periferia.
2. Con un tubo capilar tomar sangre del lado de la raya roja (con anticoagulante), hasta llenar por más de la mitad del tubo. Luego taparlo con plastilina.
3. Colocar el tubo capilar en la centrífuga de hematocrito.
4. Con un lector de hematocrito, determinar el valor.


NORMALIDAD
• Valoresnormales de Hemoglobina: 
12 – 16 g/dl Varones
14 – 18 g/dl Mujeres
• Valores normales de Hematocrito: 38 – 50%

RESULTADOS
Blanco 0.000
Muestra 
Factor 36.8
0,340 * 36.8 = 12,512
Resultado de Hemoglobina 12,5 g% 



Resultado de Hematocrito 40%

CONCLUSIÓN
Se realizó en este laboratorio 2 determinaciones: Hemoglobina y Hematocritos, además se observó en un frotis elementos figuradosde la sangre en el microscopio.

Para ambas determinaciones tomamos la muestra de sangre directo de la punción con lanceta. Después de limpiar la zona del pinchazo con un antiséptico, la punción se hizo en la periferia del dedo gordo porque es la zona que tiene menos grasa. El tubo capilar se tomó la sangre del lado rojo, donde se encuentra el anticoagulante y se lo selló o tapó con un pedazode plastilina. Los tubos capilares requieren de su propio tipo de centrífuga para realizar la separación de los glóbulos rojos del plasma y así poder determinar los hematocritos.

Para la determinación de hemoglobina no hubo necesidad de tomar la absorbancia del estándar para tener el factor, debido que la casa que produce los reactivos lo dio: 36.8 g%. 

BIBLIOGRAFÍA
• Hemoglobina (s.f.)....