determinacion de la urea en la orina

 Informe de Laboratorio Nº 6


“Determinación enzimática de urea en orina”

Bioquímica General









Montecino Byron – Navarrete Bryan – Salazar Camila
Docente: Tomás Soto Rifo
Ayudante: Sebastián Ramírez
27 de Noviembre 2013
Sección: 1.1


Introducción
En todos los organismos, específicamente en la especie humana se presenta una grancantidad de compuestos químicos, estos son de gran relevancia para el funcionamiento del individuo. Uno de ellos es el nitrógeno, el cual tiene diversas aplicaciones y funciones, este se halla en forma de ácido úrico y “urea”. Esta última constituye la principal forma de excreción del nitrógeno, además corresponde a un tipo de producto de desecho que es producido en el hígado y es excretado por laorina. (1)
Los niveles de urea en el organismo dependen de cuatro factores: la dieta, el metabolismo proteico, la función renal y la función hepática, órgano en el que tiene lugar, fundamentalmente, la síntesis de urea. Alteraciones en estos parámetros ocasionan efectos sobre el individuo. (2)
Objetivos
Conocer características generales de la funcionalidad de la urea.
Emplear métodos bioquímicosen la preparación de muestras.
Determinar la concentración de urea de una muestra establecida.
Constatar y comprobar el efecto de los niveles de urea en el organismo.
Procedimiento experimental
A. Preparación de muestras
A.1 Muestras Estándares
En esta primera actividad se comenzó utilizando 3 tubos plásticos rotulados previamente (A, B Y C). El tubo “A” contenía inicialmente 30 µL deestándar urea (80 mg/dl). Se procedió a suministrar al tubo “B” un volumen de 15 µL del tubo “A” y además se le añadieron 15 µL de agua destilada (dH2O). Seguidamente, al tubo “C” se le agregaron 15 µL del tubo “B” y también se le incorporó 15 µL de dH2O. Todas las soluciones fueron homogenizadas a medidas que se agregaban los reactivos.
A.2 Muestra Problema
Se preparó a partir de una dilución deorina 1:50 (1 mL de orina en 50 mL), se realizó en un matraz de 100 mL donde se adicionó 2 mL de orina recolectada previamente.
B. Determinación de concentración de urea.
En este procedimiento se trabajó con 5 tubos de hemólisis enumerados previamente (1, 2, 3, 4 y 5). Primeramente se les suministró 1 mL de reactivo de trabajo (enzima ureasa) a todos los tubos. Luego al tubo 1 se le añadió 10 µLde dH2O; al tubo 2 se le agregó 10 µL del tubo “C”; al tubo 3 se le incorporó 10 µL del tubo “B”, al tubo 4 se le adicionó 10 µL del tubo “A” y al tubo 5 se le suministró 10 µL de orina diluida (1:50). En seguida se continuó con una incubación de 5 minutos a temperatura ambiente para todos los tubos. Posteriormente se agregó 1 mL de hipoclorito a todos los tubos. Luego se llevaron los tubos aincubación a temperatura ambiente por 10 minutos. Finalmente se procedió a medir la absorbancia de cada tubo a 578 nm mediante un espectrofotómetro.
Resultados
A medida que se agregó el hipoclorito a los tubos, estos comenzaron en su mayoría a cambiar rápidamente su coloración, siendo así, en el tubo 1 se observó un color amarillo; en el tubo 2 se apreció un tono verde claro; en el tubo 3 secontempló un tinte verde definido; en el tubo 4 se vio una tonalidad verde oscura, y por último en el tubo 5 se logró examinar una coloración un poco más oscura que la presentaba el tubo 2.
En la actividad se obtuvo lo siguiente: El tubo 1 [urea] 0 mg/dl marcó una absorbancia de 0; el tubo 2 [urea] 20 mg/dl arrojó una absorbancia de 0,241; el tubo 3 [urea] 40 mg/dl anotó una absorbancia de 0,314 y eltubo 4 [urea] 80 mg/dl indicó una absorbancia de 0,464. (Ver Anexo 1).
Mediante la representación y utilización de datos obtenidos en la fabricación de una curva de calibración (Ver Anexo 2) se obtuvo la [urea] del tubo 5, el cual había marcado una absorbancia de 0,246. Dando como resultado una [urea] = 1663 mg/dl (Ver Anexo 2, Cuadro 1).

Discusión
Primero que todo es importante destacar...