Determinacion De Salmonella

DETERMINACIÓN DE SALMONELLA
MÉTODO
La muestra utilizada fue carne molida obtenida del mercado de abastos de la Punta – Callao adquirida una hora antes de realizar la prueba de laboratorio y conservada en una bolsa plástica a temperatura ambiente. El procedimiento para el aislamiento y la detección de salmonella fue el siguiente:
1. Enriquecimiento no selectivo:
Preparar 225 ml de caldolactosado o agua peptonada bufferada, a la cual se le agrego 25 ml de la muestra (carne molida), dicha solución se procedió a incubarla a 37ºC por 24 horas.
2. Enriquecimiento selectivo:
De la solución incubada se procedió a retirar 2 ml los cuales fueron distribuidos en dos tubos de ensayo, uno con 10ml de caldo selenito cistina y el otro con 10ml de caldo tetrateonato, dichos tubosfueron incubados a 42ºC por 24 horas.
3. Medios selectivos:
Pasado el periodo de incubación se procedió a realizar la siembra por estrías. En dos placas de petri, una con agar BS (Sulfito de bismuto) y el otro con agar SS (salmonella Shigella), ambas placas se dividieron en cuatro secciones iguales en donde se sembró en 2 secciones opuestas con la solución de caldo selenito cistina y en laotras 2 secciones opuestas con caldo tetrateonato. El procedimiento de la siembra por estrías es el siguiente:
* Esterilizar el asa de siembra y cerca del mechero abrir la caja de cultivo
* Con el asa tomar una muestra de la colonia seleccionada
* Descargar la muestra en una pequeña zona de la caja con medio de cultivo cerca de la pared de la caja
* Realizar estrías, esterilizarel asa al inicio de cada estría.
* Incubar 37°C por 24 – 48 horas.

Fuente:

* Agar SS (salmonella shigella):
Es un medio selectivo para salmonella y shigella. la diferenciación de los organismos entéricos se logra mediante la incorporación de lactosa en el medio. Los organismos que fermentan lactosa producen ácido que, en presencia del indicador rojo neutro, propicia la formaciónde colonias de color rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras. Este último grupo incluye la mayoría de los patógenos intestinales, incluidos Salmonella y Shigella.

* Agar BS (sulfato de bismuto):
Es un medio altamente selectivo para salmonella. El sulfito de bismuto inhibe a la mayoría de los coliformes y a otras bacterias.

* Tetrateonato:
Eneste medio la peptona provee la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y aminoácidos. La selectividad del medio está dada por la combinación del tiosulfato de sodio y tetrationato (el tetrationato es formado en el medio con la adición de yodo y yoduro de potasio en solución). Los organismos que tienen la enzima tetrationato reductasa proliferan en el medio.
* Selenito cistina
Es un mediode enriquecimiento utilizado para la detección e identificación de microorganismos pertenecientes al género Salmonella. En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe flora Gram positiva y la mayoría de la flora entérica excepto Salmonella spp. La l-cistina es elagente reductor y fue propuesta por la FDA para el aislamiento de Salmonella en productos alimenticios incrementando la recuperación por reducción de la toxicidad del selenito.
RESULTADOS:
Después de la incubación de las placas, se deben observar la morfología colonial y compararla con la morfología típica de Salmonella typhi correspondiente al medio de cultivo. En las colonias que se forman sepueden estudiar una serie de características que nos ayudan a su identificación. A nivel morfológico, podemos estudiar la forma de las colonias, su tamaño, aspecto del borde (liso, rugoso, ondulado, ramificado, etc.), presencia de brillo, color, si crecen en el fondo, si lo hacen en la zona superficial, si producen pigmentos, etc.
AISLAMIENTO DE SALMONELLA EN AGAR SS (SALMONELLA SHIGELLA)...