DETERMINACION DE SAPONINAS

DETERMINACION DE SAPONINAS

1. MARCO TEORICO

Las saponinas son un grupo de glucósidos coloidales amorfos muy solubles en agua y que forman espuma cuando se agita la solución acuosa; están presentes en una amplia variedad de plantas. Presentan un sabor amargo, producen hemólisis de los glóbulos rojos, Son elevadamente tóxicos para animales de sangre fría como peces y anfibios. Su toxicidades relacionada con su actividad pata bajar la tensión superficial. Se sabe que forma compuestos moleculares con el colesterol provocando baja en los niveles de colesterol en el suero. También han sido involucradas en la patogénesis del hinchamiento de rumiantes por alteración de la tensión superficial y así contribuir a la "espuma de hinchamiento" por el entrampamiento de innumerables burbujas delos gases de fermentación a través de alimentos ingeridos. Aunque el término saponina es referido a compuestos ingeridos en lo que se refiere a su composición química, ellas son caracterizadas sobre la base de sus propiedades comunes y mayormente por la formación de espuma, propiedad de la cual deriva el término saponina.

El rol de las saponinas en la planta no ha sido aún establecido. Porhidrólisis completa liberan Sapogeninas (aglicones) y son azúcares (hexosas, pentosas, azúcares ácidos). Las saponinas son difícilmente purificadas y caracterizadas, y a causa de su peso molecular relativamente grande, los análisis sólo dan fórmulas empíricas aproximadas.

2. OBJETIVO
El desarrollo de la práctica permitirá al alumnado conocer y utilizar el método afrosimétrico y algunasreacciones de coloración para la determinación de saponinas en vegetales.

3. FUNDAMENTO
El método afrosimétrico consiste en hacer un extracto alcohólico del vegetal y luego filtrado, se evapora a sequedad. Una solución acuosa de esta, al ver vigorosamente agitada debe dar un esquema abundante que debe permanecer estable por lo menos 15 minutos. Este es un método cualitativo y rápido para determinarla presencia o ausencia de saponinas. Las Saponinas y sus sapogeninas insaturadas o con varios hidroxilos dan coloración con diferentes reactivos empleados para los esteroles. Por ejemplo, Liebermann-Burchard, Salkowski, etc






4. MATERIALES-
Etanol
Ácido Sulfúrico cc
Cloroformo
Anhídrido acético
α- naftol (0,1%)
Agua destilada.
Termómetro, vasos, tubos de ensayo
Embudo,cocina, hielo.

5. PROCEDIMIENTO
Se pesa 1-2 gr. de muestra seca y molida y se preparan dos tubos de ensayo por igual , añadiendo 6 ml de etanol al 75% a cada uno y se ponen al B.M. por 15 minutos. Se filtra y el extracto etanólico se evapora a sequedad, dividiéndolo e dos tubos cada extracto obtenido para realizar los siguientes ensayos:

a. Test Afrosimétrico.
Se toma uno de lostubos de ensayo con el extracto seco y se añade 5 ml de agua destilada, se calienta al B.M. por 2 minutos, se agita vigorosamente, observándose la aparición de espuma muy persistente.[5 - 20 min. (+); 20 - 25 min. (++); 30 - más (+++)].

a. Reacciones de Coloración.
A una fracción de extracto alcohólico obtenido al principio se le usará para realizar los siguientes ensayos colorimétricos.

i)Prueba de Liebermann-Burchard.- Se toma uno de los tubos con extracto seco y se añade 2ml de anhídrido acético y 2 ml de cloroformo y se enfría a 0ºC y se añade 2 gotas de ácido sulfúrico cc. La aparición de una coloración azulada que pasa a anaranjado para luego volverse verde, indica que la reacción es positiva.

ii) Prueba de Salkowski.- Se toma otro de los tubos de ensayo con extracto secoy se le añade 2 ml de cloroformo y 2 ml de ácido sulfúrico. Una coloración anaranjada indica reacción positiva.

iii) Prueba del α naftol.- En el último tubo de ensayo con extracto seco se añade 2 ml de etanol y 2 gotas de solución 0.1% de α - naftol y se adiciona por la pared del tubo de ensayo 2 ml de ácido sulfúrico concentrado. Se dirá que la reacción es positiva cuando en la interfase...