Determinación de aminoácidos terminales con grupo alfa amino libre. Método de Sanger.

Practica No. 1
Determinación de aminoácidos terminales con grupo alfa amino libre.
Método de Sanger.

Objetivos:
-.El alumno utilizará el método de Sanger para identificar los aminoácidos quecontienen el grupo alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de la hemoglobina.
Introducción:
La determinación de la estructura primaria de una proteína suele denominarse secuenciaciónExisten varias maneras de determinar la secuencia de aminoácidos, el primero en lograr esto fue Frederik Sanger, quien diseño un método capaz de determinar la secuencia de los aminoácidos en una proteína,el cual consiste en el marcaje del amino terminal a través del uso del 1-Fluoro-2,4-Dinitrobenceno (DNFB). Este compuesto químico color amarillo reacciona con los grupos amino libres en condicionesligeramente básicas, formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), también reaccionara con los grupos imidazol, fenólicos y épsilon-amino; por lo que se dará una dinitrofenilacion en la cadena lateral dela Tirosina, Histidina y Lisina.
Al hidrolizar el péptido o la proteína ya dinitrofenilada, se da una ruptura total de los enlaces peptídicos, lo que nos da como resultado un hidrolizado quecontendrá aminoácidos libres y DNP derivados que se conservan intactos, ya que su enlace es más difícil de romper.
Los DNP de aminoácidos terminales, a diferencia de los demás DNP y de los aminoácidoslibres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con

un disolvente no polar.
Estos DNP de aminos terminales son sometidos a una cromatografía en capa fina o en papel Whatman; por loque se determina por comparación con otros DNP derivados de aminoácidos, al amino terminal de la proteína.
Resultados:
Muestra
Distancia recorrida
(cm)
Distancia del disolvente
(cm)
R.F.Observaciones
Muestra
30.5
42.5
0.7176
El R.F. calculado es similar al de la valina.
Muestra (2)
19.4

0.4565
Rastros de DNFB sin reaccionar en la mezcla.
DNFB
21

0.4941
Referencia de...