Digestion con enzimas de restriccion

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Digestión con enzimas de restricción.
Introducción:
Una enzima de restricción (o endonucleasas de restricción) son enzimas que se unen a moléculas de DNA de doble cadena y lo fragmentan en sitiosespecíficos de acuerdo a secuencias nucleotídicas reconocidas por cada una en forma particular.
Para utilizar una enzima de restricción es muy importante verificar las condiciones de reacciónespecificas como pH y concentración de sales (proporcionadas por el amortiguador de digestión)
El mecanismo de corte de DNA se realiza a través del ruptura de 2 enlaces fosfodiester en la doble hebra, lo queda lugar a dos extremos de DNA. Éstos pueden ser romos (cuando los enlaces rotos coinciden) o Cohesivos/escalonados.
Uno de los campos en los que el uso de enzimas de restricción ha tenido mayorimplicación ha sido el diagnóstico de enfermedades genéticas relacionadas con cambios en la secuencia del ADN, ya sean mutaciones puntuales, inserciones o deleciones de fragmentos. Si éstas se producenen un sitio de reconocimiento de la enzima de restricción, al producirse eliminarán o agregarán nuevos sitios de corte. Al aplicar esta enzima al gen de una persona sana y una enferma se deberíanobservar distintas cantidades de fragmentos para cada caso en una electroforesis.

Detección de la mutación Glu6Val en el gen de la beta globina.
Para determinar la presencia de esta mutación, elsegmento amplificado de 268 pb se somete a una digestión con la enzima de restricción BSU36I.
La digestión dará como resultado:
• Sanos: 2 fragmentos, uno de 213 pb y otro de 55pb.
• Afectados: no secorta y permanece el segmento de 268pb.

Metodología:
Digestión:
• Se nos dieron 2 tubos eppendorf de 1.5 ml, los cuales contenían 2.5µl de producto amplificado de una familia.
• En un tubo apartepreparar el mix de la reacción de digestión.
• Agregar 17.5ml del mix de digestión a cada tubo y mezclar perfectamente.
• Agregar una gota de aceite mineral para evitar la evaporación de los...
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