Enzimas de restriccion

*Enzimas de
restriccion
Keren Cruz

*Que son?
*Un enzima de restricción (o endonucleasa

de restricción) es aquella que puede
reconocer una secuencia característica de
nucleótidos dentro de unamolécula de
ADN y cortar el ADN en ese punto en
concreto, llamado sitio o diana de
restricción, o en un sitio no muy lejano a
este. Los sitios de restricción cuentan con
entre 4 y 6 pares de bases, con lasque
son reconocidos.

*Como se usan?
*El mecanismo del corte de ADN se realiza a través

de la ruptura de dos enlaces fosfodiéster en la
doble hebra, lo que da lugar a dos extremos de
DNA. Éstospueden ser romos (cuando los enlaces
rotos coinciden) o Cohesivos/escalonados. Estos
últimos tienen tendencia a volver a unirse de modo
espontáneo, ya que los extremos se pueden unir a
otros extremoscoincidentes que pueda haber en la
cercanía (Apareamiento de Watson & Crick).
*Corte de EcoRI dejando extremos cohesivos.
*Restricción de SmaI dejando extremos romos.
*Los fragmentos de ADN obtenidos deeste modo
pueden unirse por otras enzimas llamadas ligasas

*Las enzimas de

restricción que a
pesar de ser
distintas y provenir
de distintas
especies, tienen la
misma secuencia de
reconocimiento ydejan el mismo
extremo cohesivo,
pero no cortan en el
mismo sitio, son
llamadas
isoesquizómeros

* Uno de los campos en los

que las enzimas de
restricción han tenido
mayor implicación ha sido
eldiagnóstico de
enfermedades genéticas
relacionadas con cambios
en la secuencia del ADN,
ya sean mutaciones
puntuales, inserciones o
deleciones de fragmentos.
Si éstas se producen en un
sitio dereconocimiento de
la enzima de restricción, al
producirse eliminarán o
agregarán nuevos sitios de
corte. Al aplicar esta
enzima al gen de una
persona sana y una
enferma se deberían
observar distintas
cantidadesde fragmentos

*El sistema de restricción-modificación (M-R)

es usado in vivo por bacterias para
protegerse de ataques de DNA exógenos
(normalmente víricos) que ingresen en la
bacteria,...