Diluciones
Realizado por: Araceli Contreras Rodríguez Laboratorio de Microbiología General/ Depto. Microbiología, ENCB/IPN
OBJETIVO: Aprender a realizar diluciones y manejar volúmenes. DILUCION: Acción de diluir DILUIR: Añadir líquido (diluyente) a un soluto o solución DILUYENTE O DILUENTE: Líquido que diluye FACTOR DE DILUCION: Total de veces que el soluto, solución o suspensión bacterianafue diluida. DILUCION ACUMULADA: Dilución que se obtiene del producto de las diluciones individuales. Las diluciones se expresan siempre:
1: ________
Volumen total
Las bacterias las podemos diluir en cualquier medio.
1 + 9=10
Volumen soluto 1
Dilución 1:10
Volumen diluyente 9
Otros volúmenes que mantienen una dilución 1:10 0.5:5 (0.5 ml + 4.5 ml) 0.1:1 (0.1ml + 0.9 ml) . . . etc.De esta manera los volúmenes pueden ser variables adecuándonos a la dilución.
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Si yo tengo: 2.1ml (soluto)+7.2ml (diluente) =9.3 vol. Total 2.1 : 9.3 (2.1 en un volumen total de 9.3) entonces tenemos una dilución 1: 4.2 2.1 2.1 0.75ml (soluto) + 2.83ml (diluente) = 3.58ml (volumen total) 0.75 : 3.58 (0.75 en un volumen total de 3.58) entonces tenemos una dilución 1:4.7 0.75 0.75 3.6ml(soluto) + 5.1ml (diluente) = 8.7ml (volumen total) 3.6 : 8.7 (3.6 en un volumen total de 8.7) entonces tenemos una dilución 1: 2.42 3.6 3.6 Es posible que el soluto sea más grande que el diluyente, por ejemplo: 5ml (soluto) + 4ml (diluente) = 9ml (volumen total) 5 : 9 (5 en un volumen total de 9) entonces tenemos una dilución 1: 1.8 5 5 Ahora, si tuvieras que preparar 10ml de una dilución 1:15.3,significa que tengo 1ml + 14.3ml=15.3 1 ---- 15.3 X------10ml X=0.65 Ahora, si tuvieras que preparar 8ml de una dilución 1:25, significa que tengo 1ml + 24ml =25 1 ---- 24 X------8ml X=0.32 0.32 : 8 = 1:25 0.32 0.32 entonces 0.65+9.35=10ml, por lo tanto 0.65 : 10 0.65 0.65 = 1:15.3
entonces 0.32+7.68=8ml, por lo tanto
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FACTOR DE DILUCIÓN Una dilución se puede expresar de las siguientesmaneras:
10-1 = 1/10 = 1:10 El inverso de la dilución se expresa: 1 = 10-1 1 1:10 = 1 1/10
= 10
1 1 1 10
Multiplicamos extremos por extremos y medios con medios
=
10/1 =
10
Por lo tanto el Factor de dilución= 10
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PROBLEMA 1. Si Usted tiene una suspensión bacteriana con 6x109 UFC/ml y la diluye de la siguiente manera: TUBO Suspensión Diluyente Vol. transferenciaDil. Individual Dil. Acumulada Dil. final 1 6 ml 9 ml --1:2.5 1:2.5 12ml 3ml 1:5 1:12.5 12ml 3ml 1:5 1:62.5 1:62.5 Volumen de transferencia 2 3
6ml
3 ml
3 ml
9ml
Suspensión bacteriana
12ml
12ml
Volumen diluyente
6ml 15 9ml
3ml 15 12ml
3ml 15 12ml
Volumen total
Dilución individual
6:15 6 6 = 1 : 2.5 1 : 2.5
3:15 3 3 = 1: 5
multiplicar
3:15 3 3 = 1: 5multiplicar
Dilución acumulada
1 : 12.5
1 :62.5
Dil. final
Factor de dilución 62.5
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Para calcular las UFC en cada tubo, se divide la concentración inicial bacteriana entre la dilución acumulada de cada tubo
6x109=2.4 x 109 UFC/ml 2.5 6x109=4.8x108 UFC/ml 12.5 6x109= 9.6 x107 UFC/ml 12.5 tubo 1 tubo 2 tubo 3
O también puedes dividir la concentración bacteriana de cada tuboentre la dilución individual:
6x109=2.4 x 109 UFC/ml 2.5 2.4x109=4.8 x 108 UFC/ml 5 4.8x108= 9.6x109 UFC/ml 5 tubo1 tubo 2 tubo 3
Tubo1
tubo 2
tubo 3
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PROBLEMA 2. Partiendo de una suspensión bacteriana de 9x106 UFC/ml indique que diluciones en serie haría para obtener un suspensión con 1x102 UFC/ml. No puede exceder diluciones más grandes de 1:5.
9x106
Para conocer ladilución final:
1x102
DILUCIÓN FINAL=CONCENTRACIÓN INICAL= 9X106 = 1:90,000 ………………………..CONCENTRACION FINAL 1X102
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
Suspensión bacteriana 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml
0.15 ml
Dil. Indiv. 1:5 Dil. acumulada
1:5
1:5
1:5
1:125
1:5
1:125
1:5
1:625
1:5
1:5
?
1:1.152
*
1:3,125 1:15,625 1:78,125
? 1:90,000...
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